柑橘霉菌意大利青霉（Penicillium italicum）和指狀青霉（P.digitatum）引起的青、綠霉病,是柑橘采后儲運階段最為嚴重的真菌病害。DMIs類殺菌劑能夠防控此類真菌病害,但由此產(chǎn)生的耐藥性問題日益突出。柑橘霉菌DMIs抗藥分子機制研究備受關(guān)注。鈣離子作為細胞第二信使與鈣調(diào)素結(jié)合激活鈣信號通路,參與調(diào)控真菌生長發(fā)育、形態(tài)建成、環(huán)境適應(yīng)以及藥物抗性。鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶CaMK是鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的蛋白質(zhì)樞紐元件。該蛋白激酶在柑橘霉菌中的結(jié)構(gòu)與功能尚未報道。比較研究意大利青霉和指狀青霉CaMK,闡明其功能,有助于深入認識鈣信號通路調(diào)控柑橘病原真菌生長發(fā)育、環(huán)境適應(yīng)以及藥物抗性的分子機制。本研究克隆了意大利青霉（青霉）和指狀青霉（綠霉）鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶基因CaMK1,通過構(gòu)建CaMK1缺失突變株、回補株及其表型分析,闡明該基因?qū)Ω涕倜咕鸂I養(yǎng)生長、毒力、環(huán)境刺激響應(yīng)和DMIs唑類藥物抗性的調(diào)控作用。主要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)意大利青霉轉(zhuǎn)錄組解析的鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶基因序列克隆了PiCaMK1。PiCaMK1的基因組 DNA（gDNA）和 cDNA 分別為 13... 

【文章來源】：華中師范大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２構(gòu)巢曲霉鈣離子信號通路示意圖［９９］??１．３．１鈣離子信號途徑參與真菌生長發(fā)育和孢子形成??鈣離子信號途徑在真菌營養(yǎng)生長，產(chǎn)孢發(fā)育和形態(tài)建成方面發(fā)揮著重要的作??

恥學(xué)位論文??ＭＡＳＴＥＲ＇Ｓ?ＴＨＥＳＩＳ??的去磷酸化作用導(dǎo)致其從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細胞核，從而影響基因表達。當(dāng)真菌暴露于??其他脅迫時能夠激活鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶其他非Ｃｒｚｌ靶蛋白的活性。由于一些鈣調(diào)神??經(jīng)磷酸酶與ＢｃＣｒｚｌ靶基因也依賴于Ｇ亞基ＢＣＧ１和磷脂酶Ｃ，因此提出了鈣調(diào)磷??酸酶信號傳導(dǎo)與Ｇ蛋白偶聯(lián)受體系統(tǒng)之間相互聯(lián)系的系統(tǒng)模型（圖１－３）?ＤＭ。??ｌｅｗ?＿ｂｒａｎｅｓｌ的??［Ｍｇ－?］４＾?—?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ?（Ｈ２Ｏ２）??＜＞?ｃｘｎｏｓｏｌ??，？？瓠?［ＣａＪ１??—：．．．＾７?Ｉ??＾?１?ＣＡＭ?＼?—?＂?？?Ｃ?ＡＭ?ｋｉｎａｓｅｓ??Ｃａ：＋?ｓｔｏｒｅ???，，’??１?－?匕一ＢｃＰＩＣ?Ｓ?？?ＣｓＡ??ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ?｜??ＢＣＰｌ?＜—?１＾５０６??＠??ｏｔｈｅｒ??、一ＣＤＲＥ－—??圖１－３灰霉菌鈣離子信號通路示意圖［１２￣??１．３．３鈣離子信號途徑參與真菌多藥抗性??鈣信號傳導(dǎo)途徑中部分成員介導(dǎo)真菌多藥抗性。白色念珠菌高親和性鈣離子通??道蛋白Ｃｃｈｌ和Ｍｉｄｉ參與ＤＭＩｓ殺真菌劑抗性，Ｃｃｈｌ和Ｍｉｄｉ的缺失提高了菌株對??氟康唑和伊曲康唑的敏感性［１３６］。白色念珠菌低親和性鈣離子通道蛋白ＣａＲｃｈｌ基因??參與酮康唑耐受性，但突變體抗性取決于細胞外Ｃａ２＋的濃度。當(dāng)外界鈣離子濃度較??低時，ＣａＲｃｈｌ突變體對酮康唑顯示出野生型表型，將外界鈣離子濃度提高，突變??體對酮康唑變得極為敏感。推測在低鈣刺激下，鈣離子大量進入細胞，激活了鈣調(diào)??神經(jīng)磷酸酶調(diào)控對ＫＣＺ的耐受性增加，而高鈣脅迫和酮康唑藥物

發(fā)現(xiàn)了共有鈣依賴性絲氨酸－蘇氨酸??磷酸酚依賴性反應(yīng)元件（ＣＤＲＥ）位點，這足ＣｒｚＡ的結(jié)介位點。ＥＭＳＡ實驗證明??ＣｒｚＡ確實能夠結(jié)合這些上調(diào)基Ｗ中的預(yù)測ＣＤＲＥ位點。鈣螯合劑在某種程度上能??恢復(fù)煙曲霉藥物敏感性，并提高唑類抗性，具有線粒體缺陷的耐藥菌能夠通過調(diào)節(jié)??細胞質(zhì)Ｃａ２＋穩(wěn)態(tài)而改變敏感忡。這衣明線粒休功能陴礙能夠誘導(dǎo)鈣信號傳＃，激??活ＣｒｚＡ靶向調(diào)擰Ｋ游基因參巧藥物抗仲。這種線粒體異常促進多藥抗性代償性分??子機制，是煙曲霉為了在藥物應(yīng)激環(huán)境中生存而采取的折中策略（圖１－４）?〃３８］。??Ｂ＝－ｉｆ〇〇??ＢＡＰＴＡ?ＡＭ?ＣａＱ〇〇?Ｏ?＾??ｆ?００。一）??；ＣｒｚＡＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ?’??Ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?／???ｍｄｒ１?ｃ／＞＆４?ＲＯＳ?〇〇??Ｘ?（ＣｒｚＡ?）?｜?ａｂｃＣ?Ｘ??ｆＮｕｃｌｅｕｓ?ＢＳｏｗＢｏａｔｉｏｉａＭ?ａａ＾??＼?ＣＴ?‘洲他?Ｊ??——??圖１－４煙曲霉線粒體功能障礙誘導(dǎo)瀲活鈣倍吁通路��？意圖ｌ｜３８ｌ??２５??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]柑橘綠霉病菌高效基因敲除體系構(gòu)建與C-5甾醇去飽和酶基因功能研究[D]. 許謙.浙江大學(xué) 2013
[3]柑橘采后生防菌34-9抗真菌活性物質(zhì)的研究[D]. 劉昱佳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3105628