萱草（Hemerocallis fulva）是原產(chǎn)我國(guó)的多年生宿根花卉。連續(xù)開花既是萱草優(yōu)良的觀賞性狀也是育種的重要目標(biāo),但依靠傳統(tǒng)雜交育種周期緩慢且耗費(fèi)工作量大。利用分子生物技術(shù)解決連續(xù)開花萱草成花分子機(jī)理并推動(dòng)育種進(jìn)程顯得尤為重要。研究表明 TERMINAL FLOWER1（TFL1）,SHORT VEGETATIVE PHASE（SVP）及APETALA1（AP1）基因在植物成花轉(zhuǎn)變過(guò)程中占據(jù)重要作用。參考課題組前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),分離連續(xù)開花萱草‘H2006001’成花相關(guān)基因TFL1、SVP及AP1,對(duì)其表達(dá)模式與生物學(xué)功能進(jìn)行初步鑒定,探究連續(xù)開花萱草成花相關(guān)基因的功能;應(yīng)用Csy4介導(dǎo)的CRISPR/Cas9技術(shù)在擬南芥中敲除AtTFL1 AtSVP及AtAP1基因更深入地闡明成花相關(guān)基因的分子機(jī)理;首次構(gòu)建萱草PDS及TFL1基因CRISPR/Cas9敲除載體,為實(shí)現(xiàn)萱草基因編輯育種奠定研究基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.利用RT-PCR技術(shù)分離連續(xù)開花萱草’H2006001’3個(gè)成花相關(guān)基因HkTFL1,HkSVP和HkAP1,序列全長(zhǎng)分別為522bp、684 bp和774 ... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１調(diào)節(jié)擬南芥開花時(shí)間的遺傳途徑示意圖（Ｂｌｌｉｍｅｌ?ｄａ／．，?２０１５）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄ?

ｄｏｎｏｒ?ＤＮＡ?－ｄｏｎｏｒ?ＤＮＡ??■?ｘ?Ｘ?－Ｘ?ｘ??Ａｌｌｅｌｅ?１??Ｉ?ｌｏｎｉｏ／ｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｔｉｏｎ?Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｔｉｏｎ?Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｔｉｏｎ??Ａｌｌｅｌｅ?２?、?＇??Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｔｉｏｎ?Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｔｉｏｎ?Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ?ｍｕｔａｔｉｏｎ??Ｇｅｎｅ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?Ｇｅｎｅ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｇｅｎｅ?ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ??圖１．２聚類規(guī)則間隔的短回文重復(fù)序列ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系統(tǒng)的靶向基因組編輯流程圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｆｌｏｗｃｈａｒｔ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔｅｄ?ｇｅｎｏｍｅ?ｅｄｉｔｉｎｇ?ｕｓｉｎｇ?ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ?ｒｅｇｕｌａｒｌｙ?ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ?ｓｈｏｒｔ??ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ?ｒｅｐｅａｔｓ?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９?（Ａｂｄｅｌｒａｈｍａｎ?ｅｔ？／．，?２０１８）??１．４．２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系統(tǒng)在植物中的研宄進(jìn)展及應(yīng)用前景??在植物中，利用ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系統(tǒng)進(jìn)行基＿組編輯在２０１３年首次被報(bào)道（Ｌｉ??ｅＺａ／ＪＯｌ＾Ｎｅｋｒａｓｏｖｄｆｌ／．ＪＯＤ；?ＳｈａｎＷｔ／／．，２０．１３），除了在模式植物擬甫芥（Ｃｈｅｎｅ／??ｔ／／．，２０１７；?Ｍａｏ?以〇／＋，２０１３）和煙草（Ｇａｏ?ｅ／ｄ，２０１５）夕卜，ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９?系統(tǒng)還廣泛??的應(yīng)用于多種水果、農(nóng)作物及觀賞植物的基因組編輯，例如葡萄（Ｗａｎｇ?ｄ?ａ／．，２０１８）、??水稻（Ｚｈｏｕ?ｅ／ａ／．，２０１４）、小：麥（Ｕｐａｄｈｙａｙ?ｄ

?ＡＴＴ５９２５８??２５?廣?ＣＣＴＦＬ１ＸＰ００６４３０２２?????ＰａＴＦＬＩ?ＡＴＴ５９２５７?????ＶｃＴＦＬＩ?ＡＲＴ９１２８９???ＭｃＴＦＬＩ?ＯＶＡ０３５７１??６１?ｊ?ＡｔＴＦＬＩ?ＡＮＳ１２８６８??Ｉ?ＭｔＴＦＬＩ?ＫＥＨ４２０４０??２９?Ｉ?ＶｃＴＦＬＩ?ＡＤＦ８０８９７??—??ＪｃＴＦＬＩ?ＮＰ００１２９２９６７??￣２７］?｜?ＨａＴＦＬＩ?ＡＤＯ６１０１５??￣￣ｉｉｌ?ＲｃＴＦＬＩ?ＡＦＩ９３４３１??圖２．２?ｉＫＴＦＷ基因的克隆及多序列比對(duì)分析??Ａ．欣７ＦＷ基因ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果；ＢＵＦＷ基因序歹！基因保守結(jié)構(gòu)域；Ｄ．不同物種??ＴＦＬ１蛋白的多序列比對(duì)；Ｅ．?ＨｋＴＦＬＩ的氨基酸序列和其他物種ＴＦＬ１的系統(tǒng)發(fā)育樹分析??ＡｏＴＦＬＩ?｛Ａｓｐａｒａｇｕｓ?ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ），?ＨｋＴＦＬＩ?（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓ?４Ｈ２００６０〇ｒ），?ＣｓＴＦＬＩ?｛Ｃｒｏｃｕｓ?ｓａｔｉｖｕｓ），??ＡｃＴＦＬＩ?（Ａｎａｎａｓ?ｃｏｍｏｓｕｓ），?ＰｄＴＦＬＩ?（Ｐｈｏｅｎｉｘ?ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ），?ＳｉＴＦＬＩ?（Ｓｅｔａｒｉａ?ｉｔａｌｉｃａ），?ＢｏＴＦＬＩ??（Ｂａｍｂｕｓａ?ｏｌｄｈａｍｉｉ），?ＨｖＴＦＬｌ?（Ｈｏｒｄｅｕｍ?ｖｕｌｇａｒｅ），?ＳｂＴＦＬＩ?（Ｓｏｒｇｈｕｍ?ｂｉｃｏｌｏｒ），?ＺｍＴＦＬＩ?（Ｚｅａ?ｍａｙｓ），??ＡｔＴＦＬＩ?（Ａｍｂｏｒｅｌｌａ?ｔｒｉｃｈｏｐｏｄａ），?ＺｍＴＦＬＩ?（Ｚｏｓｔｅｒａ?ｍａｒｉｎａ），?ｌ＾ＴＹｈ＼｛Ｌｏｌｉｕｍ?ｐｅｒｅｎｎｅ），??ＯｓＴＦＬｌ（０ｒｙｚａ?ｓａｔ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]山核桃SVP基因功能研究[D]. 吳迪.浙江農(nóng)林大學(xué) 2019
[2]玉米花發(fā)育基因ZAP1的克隆與功能淺析[D]. 徐學(xué)良.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]細(xì)葉百合LpSVP基因的克隆及其對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 汪王.東北林業(yè)大學(xué) 2018
[4]草莓SVP同源基因的克隆與表達(dá)及其功能分析[D]. 趙倩.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[5]龍眼SVP基因的克隆及功能研究[D]. 魏丹鳳.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[6]芒果花器官發(fā)育AP1同源基因的功能分析[D]. 譚超.廣西大學(xué) 2013
[7]薔薇科植物TFL1和SOC1基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 李晶晶.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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