目的:編碼組成型活性絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的致癌基因PIM1參與細(xì)胞增殖,存活,分化和凋亡的調(diào)節(jié)。其表達(dá)的上調(diào)也與各種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。最近,有越來越多的文獻(xiàn)報道PIM1介導(dǎo)細(xì)胞衰老的作用,其確切機(jī)制尚不清楚。此外,在隨后的研究中,細(xì)胞衰老越來越被視為對抗癌發(fā)生的保護(hù)機(jī)制。因此,探索新的衰老機(jī)制可能為癌癥的治療提供新的思路。方法:通過使用FLAG-M2珠子免疫沉淀具有Flag-PIM1過表達(dá)的2BS細(xì)胞的細(xì)胞提取物,然后通過SDS-PAGE電泳解析,在銀染后進(jìn)行質(zhì)譜分析篩選PIM1相關(guān)蛋白。接下來在2BS細(xì)胞中過表達(dá)相關(guān)質(zhì)粒,利用co-ip和pull-down以及免疫熒光實(shí)驗進(jìn)一步驗證篩選出的目的蛋白SND1與PIM1是否相互結(jié)合。然后我們利用激酶實(shí)驗以及western-blot實(shí)驗進(jìn)一步驗證了SND1是否能被PIM1磷酸化。既然PIM1能磷酸化SDN1,那之后是否會引起細(xì)胞衰老呢,具體機(jī)制又是什么呢?緊接著我們敲低SND1并利用免疫熒光、免疫組化、CCK8、EDU、β-gal實(shí)驗來驗證我們的猜想。最后我們在2BS細(xì)胞中敲低SND1然后測序,目的是觀察本研究引起了衰老改變的哪些... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PIM1與SND1相互作用

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文現(xiàn) SND1 表達(dá)水平的降低取決于 PIM1 表達(dá)的增加，但這種現(xiàn)象在用 MG132 處理的組中未觀察到。同時，在具有 K67M 過表達(dá)的 2BS 細(xì)胞中，MG132 對 SND1的蛋白質(zhì)水平?jīng)]有影響（圖 2D）。這些結(jié)果表明 PIM1 還可以促進(jìn) SND1 的降解。綜上所訴，我們可以得出結(jié)論，PIM1 可以通過磷酸化 SND1 促進(jìn)其降解。

31圖 3：SND1 參與 PIM1 誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老。（A）EdU 摻入測定 S 期細(xì)胞的百分比。（B）用指定載體感染的 2BS 細(xì)胞的代表性顯微鏡視圖，其具有 SA-b-gal 活性染色（。C）通過 CCK8 測定法測量用指定載體感染的 2BS 細(xì)胞的細(xì)胞活力。（D）在年輕和老化的結(jié)腸腺瘤組織中 PIM1 和 SND1 的免疫組織化學(xué)染色。


本文編號：3104358