本文關(guān)鍵詞：擬南芥BES1轉(zhuǎn)錄因子家族多基因缺失突變體的構(gòu)建及表型觀察統(tǒng)計，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：BES1是擬南芥油菜素類固醇(Brassinosteroids,簡稱BR)信號通路下游的轉(zhuǎn)錄因子,該轉(zhuǎn)錄因子家族包括BES1、BZR1、BEH1、BEH2、BEH3、BEH4六個同源性很高的成員。到目前為止,已經(jīng)有很多研究者證明,此家族成員中的BZR1、BES1參與BR信號的響應(yīng)、細胞的伸長與分裂、葉與根的生長發(fā)育、維管組織的發(fā)育、植物的開花、雄蕊的育性、抗逆性、衰老等多個方面的調(diào)控。與此同時,研究者也證明了BES1和BZR1與其他轉(zhuǎn)錄因子比如BIM1、PIF4一起結(jié)合到共同靶基因的啟動子區(qū)域來共同調(diào)節(jié)靶基因的表達。然而,之前的大多數(shù)研究都是從BZR1或BES1單個轉(zhuǎn)錄因子著手,通過研究它們的功能獲得型突變體植株(bes1-D,bzr1-1D)或RNAi遺傳材料來推測它們的重要性。但是,幾乎沒有研究者用此家族基因的完全缺失突變體來進行探究此家族基因的重要性。本研究將主要通過遺傳學(xué)方式來探討B(tài)ZR1轉(zhuǎn)錄因子家族對擬南芥生長發(fā)育的重要性。對從ABRC種子庫訂購的T-DNA種子,我們首先通過RT-PCR的方式確定相應(yīng)基因完全敲除,再進行遺傳雜交,預(yù)計分別獲取純合二突變體、三突變體、四突變體、五突變體、六突變體的植株,并進行表型觀察與統(tǒng)計、相關(guān)生理實驗及統(tǒng)計。到目前為止,我們已經(jīng)獲得二突變體、三突變體、四突變體、五突變體的純合突變體植株。我們對所有突變體進行表型觀察,發(fā)現(xiàn)三周齡的苗蓮座葉長度、蓮座寬度,抽薹時間,六周齡的苗分枝數(shù)與野生型相比,差異不明顯;我們還對各突變體進行激素處理:與野生型相比,100 nM BL對各突變體的處理前后,各突變體的根長的變化不明顯;500 nM BRZ處理前后,各突變體的下胚軸變化與野生型相比也不明顯。為進一步支持我們的結(jié)論,我們還構(gòu)建了BZR1和BES1的SRDX轉(zhuǎn)基因植株,進行與上述相同的表型觀察與統(tǒng)計、生理實驗分析得出了相似的結(jié)果。此外,我們用100 nM BL對各突變體進行處理,發(fā)現(xiàn)該轉(zhuǎn)錄因子家族的靶基因CPD和DWF4的表達量變化與野生型很類似。我們還通過Promoter::GUS對六個基因的表達模式進行分析,確定各個基因的表達部位,但我們并未從各基因缺失突變體中,發(fā)現(xiàn)基因缺失對擬南芥生長發(fā)育的影響。綜上,BES1轉(zhuǎn)錄因子家族五個基因(除BEH2)的缺失可能并未對擬南芥正常生長發(fā)育造成明顯的影響。
【關(guān)鍵詞】：BZR1 BES1 轉(zhuǎn)錄因子 突變體 處理
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-10
• 第一章 前言10-17
• 1.1 油菜素內(nèi)酯信號通路10-15
• 1.1.1 油菜素內(nèi)酯的發(fā)現(xiàn)10
• 1.1.2 油菜素內(nèi)酯信號通路的完善10-12
• 1.1.3 BES1/BZR1轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)現(xiàn)及其功能研究12-15
• 1.1.4 BES1轉(zhuǎn)錄因子家族15
• 1.2 本研究的思路15-17
• 第二章 材料與方法17-33
• 2.1 基因型鑒定17-19
• 2.1.1 實驗材料17
• 2.1.2 擬南芥基因組DNA的快提溶液的配制方法17
• 2.1.3 擬南芥基因組DNA的快提方法17
• 2.1.4 擬南芥基因型鑒定17-19
• 2.2 擬南芥遺傳雜交19-20
• 2.2.1 材料19
• 2.2.2 雜交步驟19-20
• 2.3 DNA的瓊脂糖凝膠電泳20-21
• 2.3.1 瓊脂糖凝膠電泳的原理20
• 2.3.2 所需試劑與儀器20
• 2.3.3 DNA凝膠電泳的步驟20-21
• 2.4 植物總RNA之快速提取法21-22
• 2.4.1 所需試劑及材料21
• 2.4.2 植物總RNA的提取步驟21-22
• 2.5 反轉(zhuǎn)錄及RT-PCR22-23
• 2.5.1 所需儀器及試劑22
• 2.5.2 反轉(zhuǎn)錄的步驟22
• 2.5.3 RT-PCR22-23
• 2.6 基因克隆技術(shù)23-26
• 2.6.1 實驗所需試劑、儀器23
• 2.6.2 克隆基因的步驟23-25
• 2.6.3 BP反應(yīng)25
• 2.6.4 BP反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α 感受態(tài)細胞25
• 2.6.5 菌落PCR與結(jié)果判斷25-26
• 2.6.6 對入門載體做LR反應(yīng)26
• 2.6.7 表達載體的獲得26
• 2.7 轉(zhuǎn)基因植物材料的構(gòu)建26-27
• 2.7.1 農(nóng)桿菌的熱激轉(zhuǎn)化26-27
• 2.7.2 農(nóng)桿菌浸花感染27
• 2.8 大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細胞的制備27-29
• 2.8.1 所需試劑及儀器27-28
• 2.8.2 DH5α 感受態(tài)細胞的制備的方法步驟28-29
• 2.9 GUS染色技術(shù)29-30
• 2.9.1 試劑、材料與儀器29-30
• 2.9.2 GUS染色的具體步驟30
• 2.10 擬南芥種子的消毒處理30
• 2.10.1 試劑及材料30
• 2.10.2 種子消毒的步驟30
• 2.11 實驗室常用抗生素的配制30-31
• 2.11.1 試劑與材料30-31
• 2.11.2 常見抗生素的工作濃度及儲存濃度31
• 2.11.3 配制方法31
• 2.12 實驗室常用培養(yǎng)基的配制31-33
• 2.12.1 LB培養(yǎng)基的配制31-32
• 2.12.2 MS培養(yǎng)基的配制32-33
• 第三章 實驗結(jié)果33-74
• 3.1 對所有T-DNA突變體基因型鑒定33-34
• 3.2 RT-PCR檢測各T-DNA插入突變34-35
• 3.3 BES1轉(zhuǎn)錄因子家族六個基因表達模式分析35-42
• 3.4 單基因缺失突變體的表現(xiàn)型42-50
• 3.4.1 單基因缺失突變體的蓮座表型觀察與統(tǒng)計42-44
• 3.4.2 單基因缺失突變體的光下、暗下生長表型觀察與統(tǒng)計44-46
• 3.4.3 單基因缺失突變體激素處理的表型觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析46-48
• 3.4.4 單基因缺失突變體抽薹時間、分枝數(shù)的統(tǒng)計分析48-50
• 3.5 現(xiàn)有單基因缺失突變體的遺傳雜交結(jié)果50-51
• 3.6 現(xiàn)有雙基因、多基因缺失突變體表型觀察與數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計51-67
• 3.6.1 雙基因、多基因缺失突變體的蓮座表型觀察與統(tǒng)計51-54
• 3.6.2 雙基因、多基因缺失突變體的光下、暗下生長表型觀察與統(tǒng)計54-59
• 3.6.3 雙基因、多基因缺失突變體激素處理的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析59-62
• 3.6.4 雙基因、多基因缺失突變體抽薹時間、分枝數(shù)的統(tǒng)計分析62-65
• 3.6.5 部分多基因缺失突變體 100 nM BL處理前后BR合成基因的表達量變化65-67
• 3.7 BZR1-SRDX和BES1-SRDX轉(zhuǎn)基因植株構(gòu)建、表型觀察與統(tǒng)計67-74
• 3.7.1 轉(zhuǎn)基因材料的蓮座葉表型觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計67-69
• 3.7.2 轉(zhuǎn)基因材料的光下、暗下生長表型觀察與統(tǒng)計69-71
• 3.7.3 激素處理前后的轉(zhuǎn)基因植株的表型觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析71-72
• 3.7.4 轉(zhuǎn)基因植株的抽薹時間、分枝數(shù)的統(tǒng)計分析72-74
• 第四章 討論74-78
• 附錄78-81
• 參考文獻81-85
• 致謝85

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