本文關(guān)鍵詞：擬南芥BES1轉(zhuǎn)錄因子家族多基因缺失突變體的構(gòu)建及表型觀察統(tǒng)計(jì)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：BES1是擬南芥油菜素類固醇(Brassinosteroids,簡(jiǎn)稱BR)信號(hào)通路下游的轉(zhuǎn)錄因子,該轉(zhuǎn)錄因子家族包括BES1、BZR1、BEH1、BEH2、BEH3、BEH4六個(gè)同源性很高的成員。到目前為止,已經(jīng)有很多研究者證明,此家族成員中的BZR1、BES1參與BR信號(hào)的響應(yīng)、細(xì)胞的伸長(zhǎng)與分裂、葉與根的生長(zhǎng)發(fā)育、維管組織的發(fā)育、植物的開(kāi)花、雄蕊的育性、抗逆性、衰老等多個(gè)方面的調(diào)控。與此同時(shí),研究者也證明了BES1和BZR1與其他轉(zhuǎn)錄因子比如BIM1、PIF4一起結(jié)合到共同靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域來(lái)共同調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。然而,之前的大多數(shù)研究都是從BZR1或BES1單個(gè)轉(zhuǎn)錄因子著手,通過(guò)研究它們的功能獲得型突變體植株(bes1-D,bzr1-1D)或RNAi遺傳材料來(lái)推測(cè)它們的重要性。但是,幾乎沒(méi)有研究者用此家族基因的完全缺失突變體來(lái)進(jìn)行探究此家族基因的重要性。本研究將主要通過(guò)遺傳學(xué)方式來(lái)探討B(tài)ZR1轉(zhuǎn)錄因子家族對(duì)擬南芥生長(zhǎng)發(fā)育的重要性。對(duì)從ABRC種子庫(kù)訂購(gòu)的T-DNA種子,我們首先通過(guò)RT-PCR的方式確定相應(yīng)基因完全敲除,再進(jìn)行遺傳雜交,預(yù)計(jì)分別獲取純合二突變體、三突變體、四突變體、五突變體、六突變體的植株,并進(jìn)行表型觀察與統(tǒng)計(jì)、相關(guān)生理實(shí)驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)。到目前為止,我們已經(jīng)獲得二突變體、三突變體、四突變體、五突變體的純合突變體植株。我們對(duì)所有突變體進(jìn)行表型觀察,發(fā)現(xiàn)三周齡的苗蓮座葉長(zhǎng)度、蓮座寬度,抽薹時(shí)間,六周齡的苗分枝數(shù)與野生型相比,差異不明顯;我們還對(duì)各突變體進(jìn)行激素處理:與野生型相比,100 nM BL對(duì)各突變體的處理前后,各突變體的根長(zhǎng)的變化不明顯;500 nM BRZ處理前后,各突變體的下胚軸變化與野生型相比也不明顯。為進(jìn)一步支持我們的結(jié)論,我們還構(gòu)建了BZR1和BES1的SRDX轉(zhuǎn)基因植株,進(jìn)行與上述相同的表型觀察與統(tǒng)計(jì)、生理實(shí)驗(yàn)分析得出了相似的結(jié)果。此外,我們用100 nM BL對(duì)各突變體進(jìn)行處理,發(fā)現(xiàn)該轉(zhuǎn)錄因子家族的靶基因CPD和DWF4的表達(dá)量變化與野生型很類似。我們還通過(guò)Promoter::GUS對(duì)六個(gè)基因的表達(dá)模式進(jìn)行分析,確定各個(gè)基因的表達(dá)部位,但我們并未從各基因缺失突變體中,發(fā)現(xiàn)基因缺失對(duì)擬南芥生長(zhǎng)發(fā)育的影響。綜上,BES1轉(zhuǎn)錄因子家族五個(gè)基因(除BEH2)的缺失可能并未對(duì)擬南芥正常生長(zhǎng)發(fā)育造成明顯的影響。
【關(guān)鍵詞】：BZR1 BES1 轉(zhuǎn)錄因子 突變體 處理
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-10
• 第一章 前言10-17
• 1.1 油菜素內(nèi)酯信號(hào)通路10-15
• 1.1.1 油菜素內(nèi)酯的發(fā)現(xiàn)10
• 1.1.2 油菜素內(nèi)酯信號(hào)通路的完善10-12
• 1.1.3 BES1/BZR1轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)現(xiàn)及其功能研究12-15
• 1.1.4 BES1轉(zhuǎn)錄因子家族15
• 1.2 本研究的思路15-17
• 第二章 材料與方法17-33
• 2.1 基因型鑒定17-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2.1.2 擬南芥基因組DNA的快提溶液的配制方法17
• 2.1.3 擬南芥基因組DNA的快提方法17
• 2.1.4 擬南芥基因型鑒定17-19
• 2.2 擬南芥遺傳雜交19-20
• 2.2.1 材料19
• 2.2.2 雜交步驟19-20
• 2.3 DNA的瓊脂糖凝膠電泳20-21
• 2.3.1 瓊脂糖凝膠電泳的原理20
• 2.3.2 所需試劑與儀器20
• 2.3.3 DNA凝膠電泳的步驟20-21
• 2.4 植物總RNA之快速提取法21-22
• 2.4.1 所需試劑及材料21
• 2.4.2 植物總RNA的提取步驟21-22
• 2.5 反轉(zhuǎn)錄及RT-PCR22-23
• 2.5.1 所需儀器及試劑22
• 2.5.2 反轉(zhuǎn)錄的步驟22
• 2.5.3 RT-PCR22-23
• 2.6 基因克隆技術(shù)23-26
• 2.6.1 實(shí)驗(yàn)所需試劑、儀器23
• 2.6.2 克隆基因的步驟23-25
• 2.6.3 BP反應(yīng)25
• 2.6.4 BP反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α 感受態(tài)細(xì)胞25
• 2.6.5 菌落PCR與結(jié)果判斷25-26
• 2.6.6 對(duì)入門(mén)載體做LR反應(yīng)26
• 2.6.7 表達(dá)載體的獲得26
• 2.7 轉(zhuǎn)基因植物材料的構(gòu)建26-27
• 2.7.1 農(nóng)桿菌的熱激轉(zhuǎn)化26-27
• 2.7.2 農(nóng)桿菌浸花感染27
• 2.8 大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞的制備27-29
• 2.8.1 所需試劑及儀器27-28
• 2.8.2 DH5α 感受態(tài)細(xì)胞的制備的方法步驟28-29
• 2.9 GUS染色技術(shù)29-30
• 2.9.1 試劑、材料與儀器29-30
• 2.9.2 GUS染色的具體步驟30
• 2.10 擬南芥種子的消毒處理30
• 2.10.1 試劑及材料30
• 2.10.2 種子消毒的步驟30
• 2.11 實(shí)驗(yàn)室常用抗生素的配制30-31
• 2.11.1 試劑與材料30-31
• 2.11.2 常見(jiàn)抗生素的工作濃度及儲(chǔ)存濃度31
• 2.11.3 配制方法31
• 2.12 實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配制31-33
• 2.12.1 LB培養(yǎng)基的配制31-32
• 2.12.2 MS培養(yǎng)基的配制32-33
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-74
• 3.1 對(duì)所有T-DNA突變體基因型鑒定33-34
• 3.2 RT-PCR檢測(cè)各T-DNA插入突變34-35
• 3.3 BES1轉(zhuǎn)錄因子家族六個(gè)基因表達(dá)模式分析35-42
• 3.4 單基因缺失突變體的表現(xiàn)型42-50
• 3.4.1 單基因缺失突變體的蓮座表型觀察與統(tǒng)計(jì)42-44
• 3.4.2 單基因缺失突變體的光下、暗下生長(zhǎng)表型觀察與統(tǒng)計(jì)44-46
• 3.4.3 單基因缺失突變體激素處理的表型觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析46-48
• 3.4.4 單基因缺失突變體抽薹時(shí)間、分枝數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析48-50
• 3.5 現(xiàn)有單基因缺失突變體的遺傳雜交結(jié)果50-51
• 3.6 現(xiàn)有雙基因、多基因缺失突變體表型觀察與數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)51-67
• 3.6.1 雙基因、多基因缺失突變體的蓮座表型觀察與統(tǒng)計(jì)51-54
• 3.6.2 雙基因、多基因缺失突變體的光下、暗下生長(zhǎng)表型觀察與統(tǒng)計(jì)54-59
• 3.6.3 雙基因、多基因缺失突變體激素處理的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析59-62
• 3.6.4 雙基因、多基因缺失突變體抽薹時(shí)間、分枝數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析62-65
• 3.6.5 部分多基因缺失突變體 100 nM BL處理前后BR合成基因的表達(dá)量變化65-67
• 3.7 BZR1-SRDX和BES1-SRDX轉(zhuǎn)基因植株構(gòu)建、表型觀察與統(tǒng)計(jì)67-74
• 3.7.1 轉(zhuǎn)基因材料的蓮座葉表型觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)67-69
• 3.7.2 轉(zhuǎn)基因材料的光下、暗下生長(zhǎng)表型觀察與統(tǒng)計(jì)69-71
• 3.7.3 激素處理前后的轉(zhuǎn)基因植株的表型觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析71-72
• 3.7.4 轉(zhuǎn)基因植株的抽薹時(shí)間、分枝數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析72-74
• 第四章 討論74-78
• 附錄78-81
• 參考文獻(xiàn)81-85
• 致謝85

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本文編號(hào)：310189