在生物體的長期的進化過程中,為了抵抗外界病原體的感染,脊椎動物已經(jīng)進化出了較完善的免疫系統(tǒng)。脊椎動物的免疫系統(tǒng),是它們防御疾病的重要組成部分,可以分為先天性免疫系統(tǒng)（Innate Immunity System）和適應(yīng)性或者獲得性免疫系統(tǒng)（Adaptive or Acquired Immunity System）。Toll樣受體（Toll-like receptors,TLRs）在生物體對病原體的鑒別的過程中,發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。MicroRNAs（mi RNAs）是一種小的RNA分子,具有內(nèi)源性的和非編碼的特征,約含18²5個核苷酸,能夠在轉(zhuǎn)錄后水平上通過誘導(dǎo)靶基因mRNA的降解或者抑制蛋白質(zhì)翻譯的方式來調(diào)控各種生理過程。當(dāng)機體感染病原體時,免疫細胞會通過模式識別受體特異性的識別病原體的組成部分并激活下游的信號通路,從而引起促炎癥細胞因子和I型干擾素的產(chǎn)生。在本研究中通過對實驗室利用高通量測序獲得的鰻弧菌感染前后miRNA的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行分析,篩選出了病原體感染相關(guān)的差異性表達的miRNA,對其中的幾個mi RNA對Toll受體的靶標(biāo)調(diào)控進行了研究,研究結(jié)論如下:... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-122的特征分析

第三章 結(jié)果與討論在不同的時間點進行了具體的研究。與未感染鰻弧菌的情況下的 miR-122 的表達量相比，在其感染后 48 h，鮸魚的 miR-122 的表達量下降了 0.013 倍。然而，與未感染的陰性對照進行比較，TLR14 的表達量強烈地升高，在鰻弧菌感染后的 48 h，大約上升了 11.85 倍，如圖 3-2 所示。由此可知，在鰻弧菌感染的條件下，鮸魚 miR-122 能夠負(fù)性調(diào)控 TLR14 的表達量。miR-122 的表達量的下調(diào)，表明 miR-122 在病原體的感染條件下，可能參與對鰻弧菌的免疫方面的負(fù)性調(diào)控。為了進一步確認(rèn)這種關(guān)鍵性的變化趨勢，我們使用在 LPS 的刺激鮸魚的巨噬細胞的條件下，來模擬進行體外的感染條件下，進一步地對 miR-122 和 TLR14 的表達量進行檢測。與未感染 LPS 的細胞作為陰性對照相比較，在細胞感染 LPS 后的 3 h 和 6h 后，miR-122 的表達量是下降的，而 TLR14 的表達量是上升的，如圖 3-3 所示。綜上可以看出，在體外的感染性實驗和在體內(nèi)的攻毒的實驗情況下，這些表達量的結(jié)果可以清楚地表明，miR-122 能夠負(fù)性調(diào)控 TLR14 的表達量。

圖 3-3 鮸魚 miR-122(A) 和 TLR14 (B) 在 LPS 刺激鮸魚巨噬細胞的表達圖譜Fig.3-3 The time-course expression patterns of miR-122 (A) and TLR14 (B) in macrophages of miiuycroaker with LPS stimulation. Data are expressed as the mean ± SD (n = 3).3.1.4 雙熒光素酶報告基因分析miRNA 對靶基因的調(diào)控作用是通過與其 3’UTR 區(qū)域的靶作用位點相結(jié)合來實現(xiàn)其負(fù)調(diào)控作用的。為了確定 TLR14 是否能夠作為 miR-122 的直接靶基因，我們利用計算機軟件分析數(shù)據(jù)庫來對 miR-122 在 TLR14 3’UTR 非翻譯區(qū)上的靶向結(jié)合位點進行了預(yù)測。也就是說，是將預(yù)測得到的“種子區(qū)域”的靶向結(jié)合區(qū)域進行了點突變，突變的序列過程如下圖 3-4 所示。

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本文編號：3091513