在生物體的長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中,為了抵抗外界病原體的感染,脊椎動(dòng)物已經(jīng)進(jìn)化出了較完善的免疫系統(tǒng)。脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng),是它們防御疾病的重要組成部分,可以分為先天性免疫系統(tǒng)（Innate Immunity System）和適應(yīng)性或者獲得性免疫系統(tǒng)（Adaptive or Acquired Immunity System）。Toll樣受體（Toll-like receptors,TLRs）在生物體對(duì)病原體的鑒別的過程中,發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。MicroRNAs（mi RNAs）是一種小的RNA分子,具有內(nèi)源性的和非編碼的特征,約含18²5個(gè)核苷酸,能夠在轉(zhuǎn)錄后水平上通過誘導(dǎo)靶基因mRNA的降解或者抑制蛋白質(zhì)翻譯的方式來調(diào)控各種生理過程。當(dāng)機(jī)體感染病原體時(shí),免疫細(xì)胞會(huì)通過模式識(shí)別受體特異性的識(shí)別病原體的組成部分并激活下游的信號(hào)通路,從而引起促炎癥細(xì)胞因子和I型干擾素的產(chǎn)生。在本研究中通過對(duì)實(shí)驗(yàn)室利用高通量測(cè)序獲得的鰻弧菌感染前后miRNA的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,篩選出了病原體感染相關(guān)的差異性表達(dá)的miRNA,對(duì)其中的幾個(gè)mi RNA對(duì)Toll受體的靶標(biāo)調(diào)控進(jìn)行了研究,研究結(jié)論如下:... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

miR-122的特征分析

第三章 結(jié)果與討論在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行了具體的研究。與未感染鰻弧菌的情況下的 miR-122 的表達(dá)量相比，在其感染后 48 h，鮸魚的 miR-122 的表達(dá)量下降了 0.013 倍。然而，與未感染的陰性對(duì)照進(jìn)行比較，TLR14 的表達(dá)量強(qiáng)烈地升高，在鰻弧菌感染后的 48 h，大約上升了 11.85 倍，如圖 3-2 所示。由此可知，在鰻弧菌感染的條件下，鮸魚 miR-122 能夠負(fù)性調(diào)控 TLR14 的表達(dá)量。miR-122 的表達(dá)量的下調(diào)，表明 miR-122 在病原體的感染條件下，可能參與對(duì)鰻弧菌的免疫方面的負(fù)性調(diào)控。為了進(jìn)一步確認(rèn)這種關(guān)鍵性的變化趨勢(shì)，我們使用在 LPS 的刺激鮸魚的巨噬細(xì)胞的條件下，來模擬進(jìn)行體外的感染條件下，進(jìn)一步地對(duì) miR-122 和 TLR14 的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。與未感染 LPS 的細(xì)胞作為陰性對(duì)照相比較，在細(xì)胞感染 LPS 后的 3 h 和 6h 后，miR-122 的表達(dá)量是下降的，而 TLR14 的表達(dá)量是上升的，如圖 3-3 所示。綜上可以看出，在體外的感染性實(shí)驗(yàn)和在體內(nèi)的攻毒的實(shí)驗(yàn)情況下，這些表達(dá)量的結(jié)果可以清楚地表明，miR-122 能夠負(fù)性調(diào)控 TLR14 的表達(dá)量。

圖 3-3 鮸魚 miR-122(A) 和 TLR14 (B) 在 LPS 刺激鮸魚巨噬細(xì)胞的表達(dá)圖譜Fig.3-3 The time-course expression patterns of miR-122 (A) and TLR14 (B) in macrophages of miiuycroaker with LPS stimulation. Data are expressed as the mean ± SD (n = 3).3.1.4 雙熒光素酶報(bào)告基因分析miRNA 對(duì)靶基因的調(diào)控作用是通過與其 3’UTR 區(qū)域的靶作用位點(diǎn)相結(jié)合來實(shí)現(xiàn)其負(fù)調(diào)控作用的。為了確定 TLR14 是否能夠作為 miR-122 的直接靶基因，我們利用計(jì)算機(jī)軟件分析數(shù)據(jù)庫(kù)來對(duì) miR-122 在 TLR14 3’UTR 非翻譯區(qū)上的靶向結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了預(yù)測(cè)。也就是說，是將預(yù)測(cè)得到的“種子區(qū)域”的靶向結(jié)合區(qū)域進(jìn)行了點(diǎn)突變，突變的序列過程如下圖 3-4 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
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