α-亞麻酸（ALA）是一種人體必需的ω-3系列多不飽和脂肪酸,在體內(nèi)可以代謝為DHA和EPA,具有增強(qiáng)智力、保護(hù)視力、預(yù)防心腦血管疾病、調(diào)節(jié)血壓、血脂等功能。目前,ALA主要來(lái)源于深海魚(yú)油,但我國(guó)食用油以植物油為主,如菜籽油、豆油、葵花油等,但它們ALA含量都較低,因此,在正常飲食情況下,我國(guó)國(guó)民每日攝入的ALA往往達(dá)不到人體所需。為改善國(guó)人ALA攝入不足的現(xiàn)狀,開(kāi)發(fā)富含ALA的植物資源具有重要的意義。菜籽油是我國(guó)主要的食用油之一,如果能提高油菜籽中ALA含量,則可以提高菜籽油的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,并可以成為一個(gè)高含量的植物ALA來(lái)源。植物ALA主要存在于植物種子油脂中,由ω-3脂肪酸脫氫酶（FAD3、FAD7、FAD8）催化亞油酸轉(zhuǎn)化而來(lái),ω-3 FAD基因是ALA合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵限速酶基因,通過(guò)調(diào)節(jié)該基因的過(guò)量表達(dá),可以提高植物中ALA含量。紫蘇是目前發(fā)現(xiàn)的ALA含量最高的油料作物,本研究利用PCR技術(shù),克隆了紫蘇高表達(dá)的FAD3、FAD7基因,并構(gòu)建種子特異性表達(dá)載體pC2301M1NPB-EFAD3,pC2301M1NPB-EFAD7,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行了美國(guó)煙草和中雙11號(hào)油菜的... 

【文章來(lái)源】：重慶師范大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 多不飽和脂肪酸及其功能
    1.2 脂肪酸脫氫酶研究進(jìn)展
        1.2.1 脂肪酸脫氫酶的結(jié)構(gòu)和分類(lèi)
        1.2.2 ω-3 脂肪酸脫氫酶研究進(jìn)展
    1.3 α-亞麻酸的植物資源和生理功能
    1.4 紫蘇
        1.4.1 紫蘇的生物學(xué)特性
        1.4.2 紫蘇的藥用價(jià)值
        1.4.3 紫蘇籽脂肪酸組成分析研究
    1.5 根癌農(nóng)桿菌特性及介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化研究
        1.5.1 根癌農(nóng)桿菌T i質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和功能
        1.5.2 Ti質(zhì)粒載體的改造和分類(lèi)
        1.5.3 根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物的步驟
        1.5.4 農(nóng)癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的優(yōu)勢(shì)
    1.6 研究目的與意義
    1.7 技術(shù)路線(xiàn)
2 試驗(yàn)材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體和菌株
        2.1.3 主要試劑與培養(yǎng)基
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 紫蘇FAD3/FAD7基因的克隆
        2.2.1 紫蘇RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 紫蘇FAD3、FAD7基因的克隆
    2.3 中間載體的構(gòu)建
        2.3.1 構(gòu)建表達(dá)載體的EFAD3/EFAD7序列克隆
        2.3.2 構(gòu)建中間載體pUCm-T-EFAD3和pUCm-T-EFAD7
    2.4 重組質(zhì)粒導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌
        2.4.1 根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.4.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞
    2.5 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化
        2.5.1 工程菌液的制備
        2.5.2 煙草遺傳轉(zhuǎn)化
        2.5.3 轉(zhuǎn)基因植株的篩選與鑒定
        2.5.4 轉(zhuǎn)基因煙草種子脂肪酸分析
    2.6 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的油菜遺傳轉(zhuǎn)化
        2.6.1 無(wú)菌苗的獲得
        2.6.2 工程菌株的培養(yǎng)
        2.6.3 轉(zhuǎn)基因油菜苗的獲得
        2.6.4 轉(zhuǎn)基因油菜的篩選與鑒定
3 結(jié)果與分析
    3.1 種子特異性表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.1 中間載體的構(gòu)建
        3.1.2 紫蘇FAD3/FAD7基因種子特異性表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.2 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因煙草的獲得
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草的分子鑒定
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草qRT-PCR檢測(cè)
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因煙草脂肪酸分析
    3.3 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的油菜遺傳轉(zhuǎn)化
        3.3.1 轉(zhuǎn)基因油菜的獲得
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因油菜的分子鑒定
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因油菜的qRT-PCR檢測(cè)
4 討論
    4.1 種子特異性表達(dá)載體的構(gòu)建
    4.2 煙草的遺傳轉(zhuǎn)化研究
    4.3 油菜的遺傳轉(zhuǎn)化研究
5 結(jié)論
    5.1 取得的研究結(jié)果
    5.2 存在的不足和下一步打算
參考文獻(xiàn)
附錄A：攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及科研情況
附錄B：pC2301M1DPB質(zhì)粒圖
附錄C：紫蘇FAD3/FAD7基因序列
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同變種及種源紫蘇種子油脂肪酸組成及含量比較[J]. 周曉晶,李可,范航,劉通,李椿方,馬超,劉玉軍.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(01)
[2]高等植物脂肪酸去飽和酶及編碼基因研究進(jìn)展[J]. 曹福亮,王歡利,郁萬(wàn)文,程華.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(02)
[3]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J]. 姚冉,石美麗,潘沈元,沈桂芳,張志芳.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2011(04)
[4]α-亞麻酸的研究進(jìn)展[J]. 楊靜,常蕊.  農(nóng)業(yè)工程. 2011(01)
[5]利用基因芯片技術(shù)研究甘藍(lán)型油菜油酸合成中差異表達(dá)基因[J]. 官梅,李栒,官春云.  作物學(xué)報(bào). 2010(06)
[6]多不飽和脂肪酸對(duì)細(xì)胞膜功能影響的研究進(jìn)展[J]. 李喜艷,王加啟,卜登攀,魏宏陽(yáng),胡菡,周凌云.  生物技術(shù)通報(bào). 2009(12)
[7]毛白楊亞油酸去飽和酶基因的克隆與表達(dá)模式分析[J]. 周洲,李永麗.  西北林學(xué)院學(xué)報(bào). 2009(05)
[8]n-3多不飽和脂肪酸DHA、EPA研究進(jìn)展[J]. 朱路英,張學(xué)成,宋曉金,況成宏,孫遠(yuǎn)征.  海洋科學(xué). 2007(11)
[9]脂肪酸脫氫酶研究進(jìn)展[J]. 李冠,杜鈺,黃瓊,李金玉.  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2007(02)
[10]種子特異性啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 劉曉娜,付暢,黃永芬.  植物學(xué)通報(bào). 2007(02)

博士論文
[1]農(nóng)桿菌介導(dǎo)菊苣遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及富硫氨基酸基因的導(dǎo)入和表達(dá)定位[D]. 張玉.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]番茄葉綠體ω-3脂肪酸去飽和酶基因（LeFAD7）的克隆及其在溫度逆境下的功能分析[D]. 劉訓(xùn)言.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3091342