發(fā)布時間：2021-03-08 19:56

　　山胡椒（Lindera glauca）,系樟科山胡椒屬（Lindera Thunb.）的芳香植物,廣泛分布于中國秦嶺及淮河以南各個省區(qū),其果實中含有大量芳香油,可供于食用和藥用,極具開發(fā)利用價值。本研究基于實驗室前期獲得的山胡椒果實轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),對其進一步注釋和篩選得到參與萜類前體物質(zhì)丙酮酸轉(zhuǎn)運的兩個基因LgBASS2和LgMPC2,開展其全長序列克隆及表達載體構(gòu)建與遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥研究,進而通過對質(zhì)體LgBASS2和線粒體LgMPC2轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的表型和基因表達分析,探究兩種丙酮酸轉(zhuǎn)運蛋白對山胡椒果實萜類合成代謝的影響;同時,開展基于染色體步移技術(shù)的LgBASS2基因啟動子序列克隆及其順式作用元件的預(yù)測分析,通過重組植物表達載體構(gòu)建以及煙草瞬時轉(zhuǎn)化和GUS組織化學(xué)染色分析,以期明確LgBASS2基因啟動子的組織表達特性和順式作用元件種類。通過上述研究,可得到如下主要結(jié)果:1.成功克隆得到山胡椒果實的丙酮酸轉(zhuǎn)運蛋白基因LgBASS2和LgMPC2,兩者序列長度分別為1,251 bp和327 bp;借助生物信息學(xué)手段和相關(guān)軟件,分別對二者的核酸序列和編碼蛋白的氨基酸進行分析,并對基因編碼... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１萜類物質(zhì)合成代謝途徑??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ａｎａｂｏｌｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｔｅｒｐｅｎｅｓ??

＆Ｓ２和ＭＰＣ２基因的克隆及生物信息學(xué)分析???２．３結(jié)果與分析??２．３．１山胡椒果實總ＲＮＡ的獲取??利用ＲＮ５３－ＥＡＳＹｓｐｉｎ?Ｐｌｕｓ多糖多酚／復(fù)雜植物ＲＮＡ快速提取試劑盒，提取獲得??山胡椒果實總ＲＮＡ，電泳結(jié)果表明，２８Ｓ?ｒＲＮＡ和１８Ｓ?ｒＲＮＡ兩條比較清晰、而５Ｓ?ｒＲＮＡ??條帶較淺；此外，２８ＳｒＲＮＡ條帶的亮度是１８ＳｒＲＮＡ的２倍，這說明從山胡椒果實??中提取得到的總ＲＮＡ降解少、產(chǎn)量高，可用于后續(xù)分子生物學(xué)實驗。??２８Ｓ??１８Ｓ?Ｐ??圖２－１山胡椒果實總ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｌ．?＾ｌａｕｃａ?ｆｒｕｉｔｓ??２．３．２山胡椒果實和ＡｇＡ／ＰＣ？基因編碼區(qū)序列的克隆??以山胡椒果實總ＲＮＡ為模板，通過ＮＣＢＩ上ＯＲＦ?ｆｉｎｄｅｒ在線工具，分析山胡椒??果實和ＭＰＣ２基因的幵放閱讀框ＯＲＦ?（Ｏｐｅｎ?ｒｅａｄｉｎｇ?ｆｒａｍｅ），可知兩個序列從??３８４－１６８４?ｂｐ和１２０－４４６?ｈｐ各自分別構(gòu)成一個完整的開放閱讀框，可分別編碼４１６和??１０８個氨基酸。通過ＰＣＲ擴增得到大小約１３００?ｂｐ和３５０?ｂｐ片段，將片段進行切膠??回收之后連接載體進行測序，通過與己知片段進行對比，證明為目的基因，大小分別??為丨２５１?ｂｐ和３２７?ｂｐ?（圖２－２?），分別命名為和基因。??ａ?Ｍ?１?ｂ?ｍ?２??ＩＢ??—ｗｓｉｂｐ??ｏｏｏｂｐ??２＆０ｂｐ??Ｂ９??圖２－２山胡椒果實Ｚ＾５／＾２和基因擴梢屯泳閣??注：ａ：?擴增電泳圖，１：?Ｌｇ５必Ｓ２基因擴增產(chǎn)物，ｂ：?

＆Ｓ２和ＭＰＣ２基因的克隆及生物信息學(xué)分析???２．３結(jié)果與分析??２．３．１山胡椒果實總ＲＮＡ的獲取??利用ＲＮ５３－ＥＡＳＹｓｐｉｎ?Ｐｌｕｓ多糖多酚／復(fù)雜植物ＲＮＡ快速提取試劑盒，提取獲得??山胡椒果實總ＲＮＡ，電泳結(jié)果表明，２８Ｓ?ｒＲＮＡ和１８Ｓ?ｒＲＮＡ兩條比較清晰、而５Ｓ?ｒＲＮＡ??條帶較淺；此外，２８ＳｒＲＮＡ條帶的亮度是１８ＳｒＲＮＡ的２倍，這說明從山胡椒果實??中提取得到的總ＲＮＡ降解少、產(chǎn)量高，可用于后續(xù)分子生物學(xué)實驗。??２８Ｓ??１８Ｓ?Ｐ??圖２－１山胡椒果實總ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｌ．?＾ｌａｕｃａ?ｆｒｕｉｔｓ??２．３．２山胡椒果實和ＡｇＡ／ＰＣ？基因編碼區(qū)序列的克隆??以山胡椒果實總ＲＮＡ為模板，通過ＮＣＢＩ上ＯＲＦ?ｆｉｎｄｅｒ在線工具，分析山胡椒??果實和ＭＰＣ２基因的幵放閱讀框ＯＲＦ?（Ｏｐｅｎ?ｒｅａｄｉｎｇ?ｆｒａｍｅ），可知兩個序列從??３８４－１６８４?ｂｐ和１２０－４４６?ｈｐ各自分別構(gòu)成一個完整的開放閱讀框，可分別編碼４１６和??１０８個氨基酸。通過ＰＣＲ擴增得到大小約１３００?ｂｐ和３５０?ｂｐ片段，將片段進行切膠??回收之后連接載體進行測序，通過與己知片段進行對比，證明為目的基因，大小分別??為丨２５１?ｂｐ和３２７?ｂｐ?（圖２－２?），分別命名為和基因。??ａ?Ｍ?１?ｂ?ｍ?２??ＩＢ??—ｗｓｉｂｐ??ｏｏｏｂｐ??２＆０ｂｐ??Ｂ９??圖２－２山胡椒果實Ｚ＾５／＾２和基因擴梢屯泳閣??注：ａ：?擴增電泳圖，１：?Ｌｇ５必Ｓ２基因擴增產(chǎn)物，ｂ：?


本文編號：3071584