細胞殺傷或是胞毒作用是免疫應答最本質(zhì)的效應之一。不論由抗體、補體介導的體液性殺傷,還是由巨噬細胞、T細胞及NK細胞等介導的細胞性殺傷,都是機體抵御病原微生物及腫瘤細胞的有效手段。七鰓鰻是古老的圓口綱生物,在進化和發(fā)育研究中具有重要地位。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),七鰓鰻受病原體感染時,粒細胞分泌一種新型免疫蛋白LIP分子,其含有Jacalin凝集素結(jié)構域和Aerolysin結(jié)構域。七鰓鰻LIP蛋白不但能夠特異性識別殺傷腫瘤細胞,還對細菌的感染具有顯著應答效應,并在固有免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。MicroRNA（miRNA）是一種長約19-25nt的小非編碼RNA,通過與m RNA 3’UTR堿基配對在轉(zhuǎn)錄后發(fā)揮作用,能夠廣泛調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的基因表達。本研究旨在明確七鰓鰻中的miRNA參與免疫調(diào)控作用,鑒定調(diào)控LIP的關鍵miRNA分子,并通過體外體內(nèi)實驗明確該miRNA分子在調(diào)控LIP參與七鰓鰻免疫防御的分子機制。1.實驗前期使用鰻弧菌感染七鰓鰻8h和17d模擬固有免疫和適應性免疫,并將0h、8h和17d的組織樣本進行總RNA的抽提及小RNA建庫測序。經(jīng)過數(shù)據(jù)質(zhì)控獲得miRNA的clean rea... 

【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

miRNA的生物發(fā)生及其作用機制[8]

遼寧師范大學碩士學位論文-7-含有該結(jié)構域的蛋白存在的共同特點在于，核酸序列間的具有更高的多態(tài)性，這也為在不同物種中搜尋鑒定此類蛋白增大了難度，未來蛋白鑒定技術的成熟將有利于進一步探索ALPs成員的分布[39]。圖1.1LIP的可溶單體的結(jié)構圖[40]Fig.1.1Phylogenetictreeofserpinsuperfamily[40]A.LIP的整體結(jié)構.LIP亞單位的凝集素模塊和溶氧素模塊的中間和C末端部分分別以藍色、橙色和綠色顯示.前發(fā)夾（假定的跨膜區(qū)）顯示為粉紅色；B.LIP與Dln1重疊.不對稱單元中LIP的第二亞單位為沙棕色，Dln1顯示為紫色；C.LIP單體的拓撲圖.在動物或植物中Aerolysin樣蛋白通常包含了Aerolysin和其他結(jié)構域，如圖1.2。不同結(jié)構域與Aerolysin融合后產(chǎn)生的新蛋白與單獨Aerolysin結(jié)構域構成的α-Toxin蛋白具有不同的功能[38,41]。例如，Hemolysin-3對雞胚和人紅細胞具有明顯的凝血特性，動物實驗表明作為人類病原體產(chǎn)生的腸毒素之一的Hemolysin-3對腸細胞游離鈣濃度的影響導致其對心臟和其他細胞具有不同程度的毒性作用[42,43]。又如，在日本蠑螈胚胎表皮中發(fā)現(xiàn)的EP37是由Aerolysin和βγ晶體結(jié)構域共同組成的一種蛋白，研究表明該蛋白在蠑螈胚胎發(fā)育及兩棲環(huán)境適應中受到嚴格調(diào)控[44]。2005年在海蟾魚（Thalassophrynenattereri）背部和頭部的兩個毒腺中首次分離出了這類可以導致皮膚水腫和疼痛的毒液毒素蛋白，并命名為Natterin，具有和LIP相同結(jié)構域，其具有激肽釋放酶活性可切割人激肽原，促進激肽的釋放，目前對其未知的功能仍有待探究[45]。

七鰓鰻miR-4561靶向LIP基因調(diào)控抗感染的功能分析-8-圖1.2溶氧素/ETX成孔超家族的結(jié)構域[38]Fig.1.2Phylogenetictreeofserpinsuperfamily[34]1-4存在于細菌中，5-11存在于真核生物中。(1)α-Toxin，gi:452163[Clostridiumsepticum];(2)Hemolysin-3，gi:2501300[Aeromonashydrophila];(3)假設蛋白BACUNI_04630，gi:160892167[BacteroidesuniformisATCC8492];(4)pXO2-60蛋白，gi:10956450[Bacillusanthracis];(5)假設蛋白CAN71829，gi:147838248[Vitisvinifera];(6)ep37-L2，gi:2339973[Cynopspyrrhogaster];(7)Natterin-3前體，gi:75571591[Thalassophrynenattereri];(8)假設蛋白NEMVEDRAFT_v1g221281，gi:156349328[Nematostellavectensis];(9)假設蛋白LOC494812，gi:148223884[Xenopuslaevis];(10)假設蛋白LOC613112，gi:73853870[Xenopustropicalis];(11)Dln1LOC568775，gi:162139040[Daniorerio].1.2.2LIP蛋白的生物學功能在先前的研究中表明LIP殺傷腫瘤細胞依賴于N-連接聚糖結(jié)合脂筏中GPI錨定蛋白（GPI-APs）和鞘磷脂（SM）的雙重識別機制[40]，增加細胞膜的通透性導致細胞器的形態(tài)改變，LIP處理后的MCF-7細胞發(fā)生了胞漿鈣離子濃度上升與炎癥信號的激活，最終出現(xiàn)細胞焦亡與程序性壞死[46]。在七鰓鰻中的LIP能夠明顯誘發(fā)腫瘤細胞死亡，其特

【參考文獻】：
期刊論文
[1]病毒來源的microRNA的研究進展[J]. 屈允月,鐘照華,佟雷.  病毒學報. 2019(06)



本文編號：3069369