基于線粒體COI基因?qū)υ颇鲜〔煌低鈦?lái)入侵生物福壽螺的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究
發(fā)布時(shí)間:2021-03-05 06:22
[目的]福壽螺(Pomacea sp.)是一種水生軟體動(dòng)物,小管福壽螺(P.canaliculata)被認(rèn)定為全球性入侵生物,并造成嚴(yán)重危害。該螺于上世紀(jì)80年代中后期入侵至云南省,隨后擴(kuò)散至10個(gè)州市33個(gè)縣,破壞入侵地的原有生態(tài)。小管福壽螺也是廣州管圓線蟲(chóng)的主要中間宿主,威脅人類(lèi)公共衛(wèi)生安全,近年來(lái)云南省已有多例人廣州管圓線蟲(chóng)病的病例報(bào)道。本論文以云南省地域內(nèi)的三大水系(瀾滄江、怒江、元江)為研究范圍,以入侵生物福壽螺為研究對(duì)象,基于線粒體氧化色素酶1基因(COI)標(biāo)志調(diào)查福壽螺的分布情況及其種類(lèi)。同時(shí)對(duì)所有樣本進(jìn)行單倍型及分子發(fā)育分析,擬揭示三大水系的福壽螺分子種群構(gòu)成,解析其入侵、定殖以及擴(kuò)散的規(guī)律。[方法]本研究采用區(qū)域抽樣法選擇了云南省瀾滄江、怒江與元江水系等所流經(jīng)的9個(gè)州/市(區(qū)/縣),總共5個(gè)區(qū)域,27個(gè)采樣點(diǎn)。對(duì)上述調(diào)查點(diǎn)州市的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng),以及周邊區(qū)域田間、地頭、池塘、菜地、水溝、魚(yú)塘等福壽螺易孳生地內(nèi)是否有福壽螺蹤跡,若發(fā)現(xiàn)存在福壽螺,采樣帶回實(shí)驗(yàn)室,取樣本腹足部分抽提全基因組DNA,常規(guī)PCR擴(kuò)增樣本的COI序列,并測(cè)序。利用MEGA6.0采用最大似然法構(gòu)建所有測(cè)序...
【文章來(lái)源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】:64 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2云南福壽螺樣本采集分布圖??isT??^臨滄市/?、玉溪??飛★★?r?SA?L?文山州?J??Vit卿河州、廣?^??
?昆明醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???2云南不同水系福壽螺COI基因序列測(cè)定??2.?1?COI基因PCR擴(kuò)增與序列確認(rèn)??運(yùn)用COI通用引物(LCO1490,HCO2198)對(duì)344份DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,凝??膠電泳檢測(cè),其擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為700bp?(見(jiàn)圖3),送公司經(jīng)測(cè)序后共獲得344條??COI基因有效序列,將測(cè)序所獲得的344條序列登錄到NCBI?BLAST數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比??對(duì),其所有序列比對(duì)Query?coverage覆蓋率、一致率均達(dá)到99%以上,可以確定均為福壽??螺序列,其中可初步確認(rèn)在344條序列中,有4條序列為斑點(diǎn)福壽螺序列,但由于樣本??量過(guò)少,故后續(xù)研究分析就不對(duì)這幾條序列進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)、單倍型分析。??圖3?PCR擴(kuò)增電泳圖(M:?DL?2000?Marker;?1-76為福壽螺樣品的基因組DNA;?7:陰性對(duì)照ddH20)??3云南省不同水系福壽蟪系統(tǒng)發(fā)育研宄結(jié)果??系統(tǒng)發(fā)育分析表明云南。硹l水系5個(gè)區(qū)域存在福壽螺屬三個(gè)種的入侵,分別為:??小管福壽螺(84.?59%)、斑點(diǎn)福壽螺(A?fflacwiata,1.16%)以及一個(gè)福壽螺未定種??(/^/raceasp.,14.?24%)。其中,_滄江上游水系區(qū)域的大理州洱源縣;中游水系區(qū)域,??臨滄市愛(ài)華鎮(zhèn)、耿馬鎮(zhèn);下游水系區(qū)域,普洱市西盟縣、景洪市勐罕鎮(zhèn)、嘎棟鄉(xiāng);怒江??26??
?昆明醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???Group?a?PcH26V?PcH2???PcH37q?QJ?Q?PcH22??T垃懇??PcH39?Ax^Hir'o??PM&^/rr<Sy^PcH1J??PcH7?(J)?Pc¥l4??PcH24?I5j?5-?1??Group?b??PcH21??〇:??i?上1?^W2H18??PcH2T?PcH4?圖?5-2??PcH48??—?A??(J??O??PcH49??m?53??注:圖5-1,?5-2,?5-3中PcH代表云南以及其他國(guó)家小管福壽螺單倍型,餅圖大小代表單倍型不??同的數(shù)目,餅圖中不同的顏色代表不同的國(guó)家??37??
本文編號(hào):3064732
【文章來(lái)源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】:64 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2云南福壽螺樣本采集分布圖??isT??^臨滄市/?、玉溪??飛★★?r?SA?L?文山州?J??Vit卿河州、廣?^??
?昆明醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???2云南不同水系福壽螺COI基因序列測(cè)定??2.?1?COI基因PCR擴(kuò)增與序列確認(rèn)??運(yùn)用COI通用引物(LCO1490,HCO2198)對(duì)344份DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,凝??膠電泳檢測(cè),其擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為700bp?(見(jiàn)圖3),送公司經(jīng)測(cè)序后共獲得344條??COI基因有效序列,將測(cè)序所獲得的344條序列登錄到NCBI?BLAST數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比??對(duì),其所有序列比對(duì)Query?coverage覆蓋率、一致率均達(dá)到99%以上,可以確定均為福壽??螺序列,其中可初步確認(rèn)在344條序列中,有4條序列為斑點(diǎn)福壽螺序列,但由于樣本??量過(guò)少,故后續(xù)研究分析就不對(duì)這幾條序列進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)、單倍型分析。??圖3?PCR擴(kuò)增電泳圖(M:?DL?2000?Marker;?1-76為福壽螺樣品的基因組DNA;?7:陰性對(duì)照ddH20)??3云南省不同水系福壽蟪系統(tǒng)發(fā)育研宄結(jié)果??系統(tǒng)發(fā)育分析表明云南。硹l水系5個(gè)區(qū)域存在福壽螺屬三個(gè)種的入侵,分別為:??小管福壽螺(84.?59%)、斑點(diǎn)福壽螺(A?fflacwiata,1.16%)以及一個(gè)福壽螺未定種??(/^/raceasp.,14.?24%)。其中,_滄江上游水系區(qū)域的大理州洱源縣;中游水系區(qū)域,??臨滄市愛(ài)華鎮(zhèn)、耿馬鎮(zhèn);下游水系區(qū)域,普洱市西盟縣、景洪市勐罕鎮(zhèn)、嘎棟鄉(xiāng);怒江??26??
?昆明醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???Group?a?PcH26V?PcH2???PcH37q?QJ?Q?PcH22??T垃懇??PcH39?Ax^Hir'o??PM&^/rr<Sy^PcH1J??PcH7?(J)?Pc¥l4??PcH24?I5j?5-?1??Group?b??PcH21??〇:??i?上1?^W2H18??PcH2T?PcH4?圖?5-2??PcH48??—?A??(J??O??PcH49??m?53??注:圖5-1,?5-2,?5-3中PcH代表云南以及其他國(guó)家小管福壽螺單倍型,餅圖大小代表單倍型不??同的數(shù)目,餅圖中不同的顏色代表不同的國(guó)家??37??
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