ABF/AREB（ABRE-binding facto/ABA-response element binding factor）蛋白是廣泛存在于植物中的一類轉錄因子,屬于bZIP類轉錄因子的A亞族,主要在植物生長發(fā)育等方面具有重要的作用。本研究從剛毛檉柳（Tamarix hispida）轉錄組數(shù)據(jù)中鑒定出一條可能與鹽脅迫應答相關的ABF基因,命名為ThABF2,該基因開放讀碼框（ORF）全長1110 bp,編碼370個氨基酸,相對分子質量82.3kDa,理論等電點（PI）為5.02。構建pBI121-GFP-ThABF2載體,亞細胞定位結果表明ThABF2蛋白定位在細胞核中。構建pGBKT7-ThABF2載體,轉化Y2H酵母感受態(tài)細胞,通過SD/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal培養(yǎng)基篩選檢測顯示ThABF2轉錄因子具有轉錄激活活性。為了研究ThABF2基因的耐鹽功能,構建了重組pROKⅡ-ThABF2和pFGC5941-ThABF2基因,進行剛毛檉柳瞬時轉化以獲得瞬時過表達和抑制表達ThABF2基因剛毛檉柳苗,同時以pROKII瞬時侵染剛毛檉柳作為對照。在NaCI脅迫下,分... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＰＣＲ擴增基因??

ａ?（ＸＰ＿０１５８７６２６２．１）；?ＣｃＡＢＦ：?Ｔ＾Ｓ?Ｃａｊａｎｕｓ?ｃａｊａｎ?（ＸＰ＿０２０２３１８７８．１）；?ＭｄＡＢＦ＇Ｍ％．?Ｍａｌｕｓ??（ｉ■咖７？ｃ＾（Ｒ＾Ｈ２３７５５？ｌ）；Ｃ７”Ｊ５Ｆ：南瓜Ｃｗ（：ｗｒ６／／＾７ｗａｓｃ／２＾７＾７（ＸＰ＿０２２２３２７３２？ｌ）；ＱＬ４及Ｆ：小果咖啡??（ＸＰ＿０２７０７２７２８．１）；?芝麻?ｚ＞＾／ｃｗｍ?（ＸＰ＿０１１０６２２８５．１）；粗線框部分為?４??個保守的磷酸化位點（Ｃ１－Ｃ４）和ｂＺＩＰ結構域??圖２－４?ＡＢＦ蛋白的多序列比對??＂丨丨■酬■■…—－????ＣｍＡＢＦ????ＺｊＡＢＦ????Ｉ??Ｐ＞ｂＡＢＦ????１????ＭｄＡＢＦ???－?ＣｃＡＢＦ????ＳＩＡＢＦ????ｐ－—＂－＂—＂＂—＂＂—＂＂＂＂—?｜??ＮｓＡＢＦ????Ｉ??ＣａＡＢＦ???ＡＨｉＡＢＦ２????＿■＿＿■丨丨關ＳｏＡＢＦ????ｆ?????ＢｖＡＢＦ??１?ＣｑＡＢＦ??圖２－５幾種ＡＢＦ植物蛋白同源序列的系統(tǒng)進化樹分析??＿１５＿??

?東北林業(yè)大學碩士學位論文???２．３．４剛毛檉柳基因的亞細胞定位??成功構建含ＧＦＰ載體的７７？ＡＳＦ２－ＧＦＰ重組基因，利用基因槍法將７７／ＡＳＦ２－ＧＦＰ基因??和ＰＢＩ１２１－ＧＦＰ基因瞬時轉化到洋蔥表皮，其中以ＰＢＩ１２１－ＧＦＰ基因為對照，結果如圖??２－６所示：??Ｄ?Ｅ?Ｆ??ＡＤ：?ＧＦＰ熒光場；ＢＥ：明場；ＣＦ：復合場??圖２－６?７ＭＳＦ２基因的亞細胞定位??從上圖中可以看到，ＰＢＩ１２卜ＧＦＰ在洋蔥表皮細胞的細胞質和細胞核中都有表達，??ＴＴ７ＡＢＦ２－ＧＦＰ只在洋蔥表皮細胞核內有表達，表明轉錄因子定位在細胞核內。??２．３．５?ＴｈＡＢＦ２轉錄因子轉錄激活活性分析??２．３．５．１?ｐＧＢＫＴ７－ｍ４５Ｆ２?載體的構建??以ｐＭＤ１８－Ｔ－質粒為模板，ＰＣＲ擴增帶有同源序列的的基因片段，??將該基因通過連接、轉化構建到ＰＧＢＫＴ７載體上，選取條帶長度正確且單一的菌液進行??測序，測序結果與７７Ｍ５Ｆ２基因序列完全一致，說明ｐＧＢｉｃｎ－ｒ／＾＾ｇｍ載體構建成功??（如圖２－７）。??－１６－??


本文編號：3064842