利用Ad-Max腺病毒載體系統(tǒng)包裝含小鼠FcγRⅡB基因的重組腺病毒;采用改進的半數(shù)組織細胞感染量(TCID₅₀)方法測定腺病毒滴度;以感染復數(shù)（MOI）為500的病毒量感染永生化小鼠骨髓來源的巨噬細胞（iBMDM）,熒光顯微鏡觀察細胞中GFP的表達,并用流式細胞術(shù)檢測FcγRⅡB基因在細胞中的表達; ELISA檢測FcγRⅡB蛋白對脂多糖（LPS）刺激后iBMDM細胞分泌IL-10的影響。結(jié)果表明:重組腺病毒質(zhì)粒pHBAd-MCMV-GFP-FcγRⅡB構(gòu)建成功;在HEK293細胞中成功包裝和擴增了重組腺病毒和空載體腺病毒,滴度分別為1×10¹⁰和2×10¹⁰ pfu·mL^-1;腺病毒感染iBMDM細胞72 h后,約60%的細胞表達GFP;流式細胞術(shù)結(jié)果顯示, FcγRIIB膜蛋白在iBMDM細胞上高表達; ELISA結(jié)果顯示, FcγRⅡB提高LPS刺激后iBMDM細胞上清液中IL-10含量。這一研究提示FcγRⅡB能抑制巨噬細胞炎癥反應。 

【文章來源】：揚州大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版). 2020,41(05)北大核心

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【部分圖文】：

重組腺病毒質(zhì)粒pHBAd-MCMV-GFP-

將腺病毒感染iBMDM細胞, 24 h后約10%細胞表達GFP (圖略), 48 h后約30%細胞表達GFP (圖2.c、e), 72 h后約60%細胞表達GFP (圖2.d、f)。未感染腺病毒的iBMDM細胞24、48和72 h后均未見綠色熒光(其中72 h未激發(fā)和激發(fā)熒光見圖2.a、b)。腺病毒感染72 h后的細胞,經(jīng)過封閉液孵育和熒光抗體染色后,流式結(jié)果表明,重組腺病毒組FcγRⅡB的平均熒光強度(MFI)是空載體腺病毒組的2.64倍(圖3), 說明重組腺病毒感染后, FcγRⅡB膜蛋白在iBMDM細胞上高表達。圖3 腺病毒感染iBMDM細胞后流式細胞術(shù)檢測FcγRIIB的表達

腺病毒感染iBMDM細胞后流式細胞術(shù)檢測FcγRIIB的表達

【參考文獻】：
期刊論文
[1]表達羊口瘡病毒B2L基因重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定[J]. 王勇,楊侃侃,王元紅,俞趙榮,潘飛,崔傭楸,蘇莉,鐘靈毓,徐前明,蔣書東,李永東.  揚州大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版). 2017(03)
[2]弓形蟲ROP18重組腺病毒載體的構(gòu)建及其對神經(jīng)干細胞C17.2凋亡的影響[J]. 張賢,甘小鳳,程正陽,都建,羅慶禮,沈繼龍,余莉.  中國人獸共患病學報. 2016(03)



本文編號：3063555