目的探究軟骨細胞-海藻酸鈉凝膠構(gòu)建體中軟骨細胞的轉(zhuǎn)錄組水平的變化。方法將軟骨細胞分別封裝在0.8%和4%海藻酸鈉溶液制成的水凝膠中,制成細胞-凝膠構(gòu)建體并培養(yǎng)一段時間。對兩種凝膠材料的交聯(lián)密度、溶脹率、模量等物理性能進行表征,然后通過RNA測序技術從這兩種培養(yǎng)條件中檢測到軟骨細胞轉(zhuǎn)錄組的差異并進行比對和分析。最后,通過q PCR和免疫組織化學對測序結(jié)果進行驗證。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn),與4%構(gòu)建體相比,0.8%構(gòu)建體具有較低的交聯(lián)密度、較高的溶脹率以及較高的營養(yǎng)交換滲透性。通過RNA測序從這兩種培養(yǎng)條件中檢測到軟骨細胞轉(zhuǎn)錄組的差異,發(fā)現(xiàn)差異表達基因（DEGs）反映在細胞外基質(zhì)（ECM）分泌、細胞周期、細胞增殖、軟骨發(fā)育等方面。值得注意的是,與軟骨ECM和細胞增殖相關的DEGs的表達在0.8%構(gòu)建體中上調(diào),而參與細胞周期和基質(zhì)降解的DEGs的表達在4%構(gòu)建體中上調(diào);在0.8%構(gòu)建體中,軟骨細胞肥大標志物的基因表達上調(diào),而4%構(gòu)建體似乎有利于軟骨細胞表型的長期維持。此外,軟骨細胞的轉(zhuǎn)錄組水平也受到構(gòu)建體培養(yǎng)時間長短的顯著影響。這些結(jié)果也通過了q PCR和免疫組織化學驗證。結(jié)論在軟骨組織工程中,不同密... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1兩種凝膠構(gòu)建體（0.8%，4%）的結(jié)構(gòu)示意圖

青島大學碩士學位論文10第三章結(jié)果3.1水凝膠的物理性質(zhì)對兩種水凝膠的物理性質(zhì)（包括溶脹能力、交聯(lián)密度、凝膠內(nèi)部大分子的擴散能力、凝膠內(nèi)部大分子的釋放能力、彈性模量以及封裝的細胞在凝膠內(nèi)部的分布）進行檢測，檢測結(jié)果如圖3.1所示。相對于0.8％凝膠，4％凝膠的溶脹率從285.8±18.39降至123.2±7.317（圖3.1A），同時，交聯(lián)密度從0.3478±0.03515增至1.421±0.1794mol/m3（圖3.1B）。0.8％凝膠和4％凝膠的有效擴散系數(shù)（De）分別為9.062±0.125×10-7cm2/s和4.328±0.3608×10-7cm2/s（圖3.1C）。圖3.1D顯示了兩種凝膠中BSA累計釋放率隨時間變化的曲線。當累積釋放低于60％時，繪制的BSA釋放值與時間平方根的關系圖如圖3.1E所示。良好的線性相關性（R2>0.97）表明BSA的釋放受菲克擴散控制。0.8％凝膠和4％凝膠的壓縮模量分別為2.355kPa和23.450kPa（圖3.1F）。如圖3.1G所示，包裹的軟骨細胞均勻分布于0.8%和4%的凝膠中。圖3.1兩種水凝膠（0.8%，4%）的物理性質(zhì)

青島大學碩士學位論文12黏著斑激酶相關途徑，等等。圖3.2凝膠構(gòu)建體調(diào)控下第7天的基因表達注：(A)兩種構(gòu)建體中表示的差異表達數(shù)。(B)在第7天兩種構(gòu)建體DEGs的火山圖。(C)在第7天兩種構(gòu)建體DEGs的熱圖。(D)第7天0.8%構(gòu)建體的上調(diào)基因的GO富集分析。(E)第7天0.8%構(gòu)建體的上調(diào)基因的KEGG通路分析。


本文編號：3063384