寡核苷酸是一類在多種疾病的診斷和治療方面具有極大應用前景的生物藥物,其中包括癌癥、神經病變和代謝紊亂等難以治愈的疾病。但由于未經修飾的寡核苷酸存在易被機體快速清除、酶穩(wěn)定性差、細胞攝取能力低,以及存在激活固有免疫反應等風險,寡核苷酸藥物向臨床轉化受到嚴重阻礙。為解決上述問題進而發(fā)展了寡核苷酸輸送載體（如陽離子聚合物、脂質體、納米顆粒等）和化學修飾的寡核苷酸,但它們均存在細胞毒性、效率低下等問題,因此仍需要開發(fā)安全高效的寡核苷酸輸送體系。基于此,本論文開展了以下兩方面的研究工作:1.設計合成了一類分子結構精確,以富勒烯C₆₀為核心,聚乙二醇和寡核苷酸共修飾的雜臂星形聚合物(以下簡稱C₆₀ pacDNA)。選用了表面修飾有12個疊氮基團,分子直徑約為5 nm(假定C₆₀核分子中連接鏈的所有鍵均處于完全拉伸的構型)的C₆₀分子為星形聚合物的核心,其表面反應位點分布相對緊湊,有利于得到PEG密度高的偶聯(lián)物,同時C₆₀核分子的化合價數目并不高,可以得到完全官能化的偶聯(lián)物。將二苯基環(huán)辛炔（... 

【文章來源】：湖南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
本文所用英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 寡核苷酸藥物
        1.2.1 反義寡核苷酸
        1.2.2 小分子干擾RNA
        1.2.3 核酸適配體
    1.3 新型寡核苷酸輸送體系
        1.3.1 球形核酸
        1.3.2 聚合物輔助壓實核酸
    1.4 納米閃光
    1.5 本論文的選題背景及主要工作
第2章 聚乙二醇-寡核苷酸修飾富勒烯核雜臂星形聚合物的制備
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗儀器和試劑
60核的制備">        2.2.2 C₆₀核的制備
60 pacDNA的制備">        2.2.3 C₆₀ pacDNA的制備
60 pacDNA納米閃光的制備">        2.2.4 C₆₀ pacDNA納米閃光的制備
        2.2.5 凝膠電泳
        2.2.6 DNA定量
    2.3 結果與討論
        2.3.1 設計原理
60核的表征">        2.3.2 C₆₀核的表征
        2.3.3 DNA和偶聯(lián)物的純化與表征
        2.3.4 PEG-DBCO的純化和表征
60 pacDNA的純化與表征">        2.3.5 C₆₀ pacDNA的純化與表征
60 pacDNA粒徑大小表征">        2.3.6 C₆₀ pacDNA粒徑大小表征
60 pacDNA納米閃光的表征">        2.3.7 C₆₀ pacDNA納米閃光的表征
    2.4 小結
第3章 聚乙二醇-寡核苷酸富勒烯核雜臂星形聚合物在納米閃光和基因調控方面的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 實驗儀器和試劑
60 pacDNA對寡核苷酸酶的穩(wěn)定性檢測">        3.2.2 C₆₀ pacDNA對寡核苷酸酶的穩(wěn)定性檢測
        3.2.3 納米閃光對寡核苷酸酶的穩(wěn)定性檢測
        3.2.4 納米閃光對目標DNA的響應
        3.2.5 細胞的培養(yǎng)
        3.2.6 共聚焦顯微鏡的測定
        3.2.7 流式細胞分析
        3.2.8 蛋白印跡分析
        3.2.9 細胞毒性檢測
    3.3 結果討論
        3.3.1 反應原理
60 pacDNA對寡核苷酸酶的抑制作用">        3.3.2 C₆₀ pacDNA對寡核苷酸酶的抑制作用
60 pacDNA納米閃光的體外檢測">        3.3.4 C₆₀ pacDNA納米閃光的體外檢測
60 pacDNA納米閃光對細胞的響應">        3.3.5 C₆₀ pacDNA納米閃光對細胞的響應
60 pacDNA的細胞攝取研究">        3.3.6 C₆₀ pacDNA的細胞攝取研究
60 pacDNA的基因調控">        3.3.7 C₆₀ pacDNA的基因調控
60 pacDNA的細胞毒性研究">        3.3.8 C₆₀ pacDNA的細胞毒性研究
    3.4 小結
結論與展望
參考文獻
附錄 攻讀碩士期間所發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3057066