發(fā)布時(shí)間：2021-03-01 00:44

　　葉酸（Folic acid,FA）是機(jī)體一碳代謝循環(huán)中重要的甲基供體,在DNA合成、穩(wěn)定性及修復(fù)中起關(guān)鍵作用。FA缺乏會(huì)導(dǎo)致DNA堿基錯(cuò)配、缺失、DNA鏈和染色體斷裂等基因組不穩(wěn)定性（Genomic instability,GIN）的發(fā)生。紡錘體組裝檢查點(diǎn)（Spindle assembly checkpoint,SAC）作為細(xì)胞有絲分裂中期與后期之間存在的一種安全監(jiān)督機(jī)制,作用是確保染色體精確分配到子代細(xì)胞,防止非整倍體細(xì)胞的產(chǎn)生。精子的質(zhì)量和密度對男性生殖至關(guān)重要,不育患者的精子質(zhì)量差、密度低,并且精子非整倍體數(shù)目明顯增加,非整倍體會(huì)促進(jìn)GIN的發(fā)生。FA缺乏是否對SAC產(chǎn)生影響,SAC在葉酸缺乏導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性中扮演者什么角色少有報(bào)道。本文旨在探討FA缺乏對小鼠精原細(xì)胞（GC-1spg）基因組穩(wěn)定性和SAC相關(guān)蛋白基因表達(dá)的影響,初步探討FA缺乏對生殖細(xì)胞基因組穩(wěn)定性影響的機(jī)制。采用CCK-8、胞質(zhì)分裂阻斷微核細(xì)胞組分析（cytokinesis-block micronucleus cytome assay,CBMN-cyt）、流式細(xì)胞術(shù)、熒光定量PCR、Western bolt... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

葉酸的主要代謝途徑Figure1.1Themajormetabolicpathwaysoffolicacid

11圖3.2CBMN-Cyt實(shí)驗(yàn)中三類CIN指標(biāo)的顯微圖A.雙核細(xì)胞BMNC.NPBD.NBudFigure3.2MicrographsofthreetypesofCINindicatorsinCBMN-cytexperimentA.Dual-corecellsB.MNC.NPBD.NBud因此，本課題為研究FA缺乏對小鼠精原細(xì)胞基因組穩(wěn)定性以及其對SAC的影響，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[24]和課題組前期的研究，選用DMEM高糖液體培養(yǎng)基（無FA）和FA粉末進(jìn)行調(diào)配，將FA濃度設(shè)置為四組，分別是無FA組（0nmol/L）、20nmol/L組、200nmol/L組和2000nmol/L組，選取小鼠精原細(xì)胞GC-1spg作為受試細(xì)胞株，用熒光定量PCR法分析兩周后SAC基因mRNA表達(dá)變化，比較不同F(xiàn)A濃度對小鼠精原細(xì)胞SAC轉(zhuǎn)錄表達(dá)影響；用westernblotting分析SAC蛋白表達(dá)變化，比較不同F(xiàn)A濃度對小鼠精原細(xì)胞SAC蛋白表達(dá)影響；用CBMN-Cyt法分析不同濃度FA對小鼠精原細(xì)胞CIN頻率的變化，了解基因組穩(wěn)定性情況；最后結(jié)合SAC的表達(dá)情況，從基因組損傷層面輔助分析不同F(xiàn)A濃度下SAC的調(diào)控機(jī)制,同時(shí)對SAC基因甲基化表達(dá)情況進(jìn)行預(yù)測，為以后其分子機(jī)制的研究奠定基矗

28第4章實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1葉酸缺乏會(huì)引起細(xì)胞形態(tài)異常隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，除正常對照組外，其他各組細(xì)胞生長速度逐漸減慢。培養(yǎng)兩周時(shí)后，與正常對照組相比，200nmol/L組形態(tài)未出現(xiàn)較大差異，20nmol/L和0nmol/L組細(xì)胞體積增大，細(xì)胞輪廓不清晰，形態(tài)不規(guī)則，尤其是0nmol/L組現(xiàn)象更加明顯，之后細(xì)胞幾乎停止增長（圖4.1）。實(shí)驗(yàn)組前期研究結(jié)果顯示：GC-1spg細(xì)胞經(jīng)過連續(xù)兩周葉酸缺乏培養(yǎng)，便可以構(gòu)建出細(xì)胞葉酸缺乏模型。圖4.1100x倒置顯微鏡下各組細(xì)胞形態(tài)A.2000nmol/L組B.200nmol/L組C.20nmol/L組D.0nmol/L組Figure4.1Cellmorphologyofeachgroupunder100xinvertedmicroscopeA.200nmol/LgroupB.2000nmol/LgroupC.200nmol/LgroupD.0nmol/Lgroup4.2葉酸缺乏對GC-1spg細(xì)胞活性的影響結(jié)合實(shí)驗(yàn)組前期研究結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)GC-1spg細(xì)胞在無葉酸狀態(tài)下連續(xù)培養(yǎng)兩周后，細(xì)胞增殖速度嚴(yán)重下降，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)條件摸索，確定了CCK-8測定時(shí)間，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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