貽貝粘合蛋白（Mussel Adhesive Protein,MAPs）,亦稱貽貝足絲蛋白（Mytilus foot proteins,Mfps）是海洋軟體動(dòng)物貽貝（Mytilidae）足部的足絲腺分泌的一類具有極強(qiáng)黏性的蛋白質(zhì)復(fù)合物。由于其液體環(huán)境下的強(qiáng)黏合能力、可降解性和極好的生物相容性的生物特點(diǎn),常被用作生物醫(yī)藥粘合劑及優(yōu)質(zhì)的醫(yī)用粘合劑。天然的MAPs,提取時(shí)易固化、含量低且成本高,研究者開(kāi)始借助基因工程技術(shù),在原核表達(dá)（大腸桿菌）及真核表達(dá)（酵母、煙草）系統(tǒng)中重組表達(dá)MAPs,探索重組蛋白的性質(zhì)及功能。原核表達(dá)的重組MAPs需在體外經(jīng)酪氨酸酶修飾后,才有一定的黏性,且表達(dá)量或者黏附性能均不如意;真核表達(dá)系統(tǒng)可以表達(dá)重組MAPs的基因,但是真核重組蛋白的表達(dá)量及重組蛋白的性能研究還沒(méi)見(jiàn)到相關(guān)資料。植物表達(dá)系統(tǒng)中有著比較高級(jí)的真核蛋白合成途徑,表達(dá)外源蛋白時(shí)可以在植物體內(nèi)進(jìn)行糖基化和磷酸化等修飾,在重組蛋白的體外修飾中就可降低成本,減少體外修飾帶來(lái)的毒性,有著安全性和規(guī)模化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。已有在煙草中重組表達(dá)地中海貽貝粘合蛋白（Mytilus galloprovincialis Foo... 

【文章來(lái)源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 貽貝研究進(jìn)展
        1.1.1 背景
        1.1.2 貽貝粘合蛋白的結(jié)構(gòu)與分類
        1.1.3 貽貝粘合蛋白的黏附機(jī)制
        1.1.4 貽貝粘合蛋白的獲取
        1.1.5 貽貝粘合蛋白功能的測(cè)定
        1.1.6 貽貝粘合蛋白用于組織粘合劑
    1.2 菊苣
        1.2.1 菊苣的用途
        1.2.2 菊苣的轉(zhuǎn)基因研究
    1.3 本工作的理論依據(jù)及意義
    1.4 本工作的主要研究?jī)?nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料及方法
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 植物受體材料
        2.1.2 相關(guān)儀器
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菊苣離體再生體系的建立
        2.2.2 菊苣葉片對(duì)卡那霉素的敏感性測(cè)定
        2.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菊苣遺傳轉(zhuǎn)化體系
        2.2.4 植物的DNA提取和PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)化后材料的體系
        2.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化
        2.2.6 轉(zhuǎn)化菊苣的獲得與移栽
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因菊苣的鑒定
1代轉(zhuǎn)基因菊苣植株的獲取及鑒定">        2.2.8 T₁代轉(zhuǎn)基因菊苣植株的獲取及鑒定
        2.2.9 轉(zhuǎn)基因菊苣中重組蛋白Mgfp-5鑒定
        2.2.10 重組蛋白Mgfp-5的微量黏附評(píng)價(jià)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 菊苣再生體系條件的優(yōu)化
    3.2 菊苣的卡那霉素敏感性確定
    3.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化
        3.3.1 外植體預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響
        3.3.2 農(nóng)桿菌的侵染濃度和侵染時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響
        3.3.3 外植體共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響
    3.4 轉(zhuǎn)Mgfp-5基因的轉(zhuǎn)化菊苣的獲得
    3.5 轉(zhuǎn)化菊苣的分子生物學(xué)鑒定
0代轉(zhuǎn)化菊苣Mgfp-5基因的PCR檢測(cè)">        3.5.1 T₀代轉(zhuǎn)化菊苣Mgfp-5基因的PCR檢測(cè)
0代轉(zhuǎn)化菊苣Mgfp-5基因的RT-PCR檢測(cè)">        3.5.2 T₀代轉(zhuǎn)化菊苣Mgfp-5基因的RT-PCR檢測(cè)
1代轉(zhuǎn)基因植株的培養(yǎng)及基因Mgfp-5的穩(wěn)定性分析">    3.6 T₁代轉(zhuǎn)基因植株的培養(yǎng)及基因Mgfp-5的穩(wěn)定性分析
1代轉(zhuǎn)基因菊苣的表型">        3.6.1 T₁代轉(zhuǎn)基因菊苣的表型
1代轉(zhuǎn)基因菊苣的分子學(xué)鑒定">        3.6.2 T₁代轉(zhuǎn)基因菊苣的分子學(xué)鑒定
1代轉(zhuǎn)基因菊苣基因分離的初步分析">        3.6.3 T₁代轉(zhuǎn)基因菊苣基因分離的初步分析
    3.7 重組Mgfp-5蛋白在菊苣中的表達(dá)與純化
    3.8 重組Mgfp-5蛋白的微觀黏附分析
        3.8.1 重組Mgfp-5蛋白的表面粗糙度
        3.8.2 重組Mgfp-5蛋白的吸附能力
第四章 小結(jié)與討論
    4.1 受體植物的選擇及其再生體系的優(yōu)化
    4.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化菊苣受體的條件優(yōu)化
        4.2.1 菊苣對(duì)卡那霉素敏感性
        4.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化
    4.3 轉(zhuǎn)Mgfp-5基因菊苣的分子生物學(xué)鑒定
    4.4 菊苣中重組Mgfp-5蛋白的表達(dá)與提純
        4.4.1 重組Mgfp-5蛋白的表達(dá)
        4.4.2 重組Mgfp-5蛋白的提純
    4.5 重組Mgfp-5蛋白的微觀黏附
論文主要結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    1 主要結(jié)論
    2 本研究的特色與創(chuàng)新
    3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間主要的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]貽貝粘蛋白Mgfp-5基因在煙草中的轉(zhuǎn)化[J]. 呂玉偉,張雨靖,呂亞維,王睿劼,楊澤熵,王英娟.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016(01)
[2]農(nóng)桿菌介導(dǎo)含硫氨基酸γ-zein轉(zhuǎn)化菊苣的初步研究[J]. 張玉,白史且,李聰.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2015(09)
[3]菊苣的藥理藥效研究進(jìn)展[J]. 孫博喻,張冰,林志健,黃勝男,王紅坡.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2015(07)
[4]人ATG4B的表達(dá)及蛋白純化和鑒定[J]. 黃蓉,徐小潔,梁迎春,張立,王濤,周麗英,杜楠,葉棋濃.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2015(02)
[5]以G418抗性為篩選標(biāo)記的深綠木霉遺傳轉(zhuǎn)化研究[J]. 唐俊,馬越,王姝妹,徐孟竹,劉生杰,陳捷.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(12)
[6]貽貝粘性蛋白組成、作用機(jī)理與應(yīng)用[J]. 朱曜曜,丁海兵,孫承君.  海洋科學(xué)進(jìn)展. 2014(04)
[7]貽貝粘蛋白的粘附成膜機(jī)理及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 王貴學(xué),蘭華林,王溢,尹鐵英,王亞洲,劉茜,王召旭.  功能材料. 2014(14)
[8]不同組培基質(zhì)對(duì)菊苣葉片再生的影響[J]. 張玉,白史且,李達(dá)旭.  草地學(xué)報(bào). 2014(01)
[9]菊苣的栽培與利用[J]. 周大榮,田松,涂鑫,宋德榮,黎智勇,周訓(xùn)海,費(fèi)文賢,邱仁燕.  畜牧與飼料科學(xué). 2013(12)
[10]植物組織培養(yǎng)中褐化的機(jī)理及對(duì)策[J]. 余紅英.  河南科技. 2013(21)

博士論文
[1]atnhx1和hvbadh1基因的克隆及對(duì)三種植物的轉(zhuǎn)化研究[D]. 趙宇瑋.西北大學(xué) 2007

碩士論文
[1]能源草菊苣的化感活性研究[D]. 解寶.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[2]海洋貽貝粘附蛋白新型生物粘合劑的研究[D]. 劉加鵬.廈門大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3049063