石細(xì)胞團(tuán)的含量及大小是決定梨果實(shí)品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一。目前已知木質(zhì)素是石細(xì)胞主要組成成分,而梨中木質(zhì)素合成關(guān)鍵酶CCoAOMT的功能目前尚不明晰。為此,克隆PbCCoAOMT1編碼區(qū)全長（MF346688.1）并構(gòu)建真核表達(dá)載體pCAMBIA1301a-PbCCoAOMT1。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法將PbCCoAOMT1轉(zhuǎn)化野生型擬南芥,利用分子檢測(cè)確定獲得陽性過表達(dá)PbCCoAOMT1擬南芥株系后,對(duì)其純合T3代株系花序莖進(jìn)行木質(zhì)素及次生細(xì)胞壁特異性染色。結(jié)果表明,在擬南芥中過表達(dá)PbCCoAOMT1可以一定程度上促進(jìn)次生壁的發(fā)育及木質(zhì)化。運(yùn)用溴乙酰法測(cè)定擬南芥花序莖中木質(zhì)素含量發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)基因植株中木質(zhì)素含量較野生型顯著上升,為野生型的1.24倍。進(jìn)一步說明PbCCoAOMT1在木質(zhì)素生物合成中具有重要作用。 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,47(05)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Pb CCo AOMT1帶酶切位點(diǎn)序列擴(kuò)增電泳圖

重組質(zhì)粒p CAMBIA1301a-Pb CCo AOMT1雙酶切驗(yàn)證圖

經(jīng)過抗性篩選的轉(zhuǎn)基因植株移栽到營養(yǎng)土中培養(yǎng)50 d后，選擇野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片，提取DNA并進(jìn)行GFP序列擴(kuò)增檢測(cè)。PCR結(jié)果顯示，經(jīng)過抗性篩選的擬南芥DNA均可擴(kuò)增出750 bp的GFP條帶，而野生型擬南芥未出現(xiàn)此條帶（圖3）。說明p CAMBIA1301a-Pb CCo AOMT1已成功整合進(jìn)野生型擬南芥基因組。隨后對(duì)3個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中Pb CCo AOMT1轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)。由圖4可知，野生型擬南芥中未檢測(cè)到Pb CCo AOMT1表達(dá)，而3個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中Pb CCo AOMT1均檢測(cè)到顯著的轉(zhuǎn)錄水平。說明Pb CCo AOMT1已成功在擬南芥中異源表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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