目的:研究細粒棘球絳蟲鈣信號通路基因的家族成員（Cam KII、Cavβ1）在蟲體發(fā)育的各個階段（棘球蚴生發(fā)層、原頭蚴及成蟲）基因表達的差異,同時利用熒光定量PCR技術研究吡喹酮（PZQ）體外干預細粒棘球絳蟲后兩基因的表達情況,推測PZQ的作用靶點。方法:分別從細粒棘球絳蟲的成蟲、原頭蚴以及棘球蚴生發(fā)層中提取總RNA,用Revert Aid First Strand c DNA Synthesis kit反轉錄成c DNA,根據(jù)Cam KII基因序列及Cavβ1基因序列設計跨越內(nèi)含子的基因特異性引物,用SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR技術,選用β-actin為內(nèi)參基因,通過由質(zhì)粒DNA建立的標準曲線分別對Cam KII基因及Cavβ1基因進行定量分析;通過從人工感染30天的比格犬的小腸中獲得細粒棘球絳蟲成蟲,體外短暫培養(yǎng)后留作實驗用,以3天為干預周期,原頭蚴及包囊為對照組,以不同濃度的為PZQ體外干預濃度,掃描電鏡（SEM）與透射電鏡（TEM）觀察PZQ干預成蟲后體表結構以及超微結構的變化。同時,收集各濃度組的成蟲樣本進行總RNA的提取,逆轉錄為c DNA,利用q RT-PCR... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同發(fā)育階段總RNA1%瓊脂糖凝膠電泳圖

M: DNA 分子質(zhì)量標準 1 EgActin 2 EgCavβ13 EgCamKIIM DL2000 DNA marker 1 EgActin 2 EgCavβ13 EgCamKII圖 2 PCR 產(chǎn)物 1%瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2 The 1%agarose gelelectrophoresis of PCR products粒陽性克隆鑒定結果物與 pEASY-T1 載體連接后并轉化進感受態(tài) DH5 細胞中，培上長出大量的單克隆菌落，隨機挑選若干單克隆菌落進行 P為轉化成功的陽性菌落。PCR 鑒定結果為所挑選的單克隆均），它們均為轉化成功的陽性菌落。

A 分子質(zhì)量標準 1 EgActin 2 EgCavβ13 Eg2000 DNA marker 1 EgActin 2 EgCavβ13 Eg圖 2 PCR 產(chǎn)物 1%瓊脂糖凝膠電泳圖ig.2 The 1%agarose gelelectrophoresis of PCR produ克隆鑒定結果EASY-T1 載體連接后并轉化進感受態(tài) DH5 細大量的單克隆菌落，隨機挑選若干單克隆菌落成功的陽性菌落。PCR 鑒定結果為所挑選的單均為轉化成功的陽性菌落。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3032925