目的:研究細(xì)粒棘球絳蟲鈣信號(hào)通路基因的家族成員（Cam KII、Cavβ1）在蟲體發(fā)育的各個(gè)階段（棘球蚴生發(fā)層、原頭蚴及成蟲）基因表達(dá)的差異,同時(shí)利用熒光定量PCR技術(shù)研究吡喹酮（PZQ）體外干預(yù)細(xì)粒棘球絳蟲后兩基因的表達(dá)情況,推測(cè)PZQ的作用靶點(diǎn)。方法:分別從細(xì)粒棘球絳蟲的成蟲、原頭蚴以及棘球蚴生發(fā)層中提取總RNA,用Revert Aid First Strand c DNA Synthesis kit反轉(zhuǎn)錄成c DNA,根據(jù)Cam KII基因序列及Cavβ1基因序列設(shè)計(jì)跨越內(nèi)含子的基因特異性引物,用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),選用β-actin為內(nèi)參基因,通過由質(zhì)粒DNA建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別對(duì)Cam KII基因及Cavβ1基因進(jìn)行定量分析;通過從人工感染30天的比格犬的小腸中獲得細(xì)粒棘球絳蟲成蟲,體外短暫培養(yǎng)后留作實(shí)驗(yàn)用,以3天為干預(yù)周期,原頭蚴及包囊為對(duì)照組,以不同濃度的為PZQ體外干預(yù)濃度,掃描電鏡（SEM）與透射電鏡（TEM）觀察PZQ干預(yù)成蟲后體表結(jié)構(gòu)以及超微結(jié)構(gòu)的變化。同時(shí),收集各濃度組的成蟲樣本進(jìn)行總RNA的提取,逆轉(zhuǎn)錄為c DNA,利用q RT-PCR... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同發(fā)育階段總RNA1%瓊脂糖凝膠電泳圖

M: DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1 EgActin 2 EgCavβ13 EgCamKIIM DL2000 DNA marker 1 EgActin 2 EgCavβ13 EgCamKII圖 2 PCR 產(chǎn)物 1%瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2 The 1%agarose gelelectrophoresis of PCR products粒陽性克隆鑒定結(jié)果物與 pEASY-T1 載體連接后并轉(zhuǎn)化進(jìn)感受態(tài) DH5 細(xì)胞中，培上長(zhǎng)出大量的單克隆菌落，隨機(jī)挑選若干單克隆菌落進(jìn)行 P為轉(zhuǎn)化成功的陽性菌落。PCR 鑒定結(jié)果為所挑選的單克隆均），它們均為轉(zhuǎn)化成功的陽性菌落。

A 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1 EgActin 2 EgCavβ13 Eg2000 DNA marker 1 EgActin 2 EgCavβ13 Eg圖 2 PCR 產(chǎn)物 1%瓊脂糖凝膠電泳圖ig.2 The 1%agarose gelelectrophoresis of PCR produ克隆鑒定結(jié)果EASY-T1 載體連接后并轉(zhuǎn)化進(jìn)感受態(tài) DH5 細(xì)大量的單克隆菌落，隨機(jī)挑選若干單克隆菌落成功的陽性菌落。PCR 鑒定結(jié)果為所挑選的單均為轉(zhuǎn)化成功的陽性菌落。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3032925