棉花是重要的經(jīng)濟(jì)作物。許多生物脅迫、非生物脅迫以及早衰等因素嚴(yán)重影響棉花的產(chǎn)量和品質(zhì)。WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,由一個(gè)或者兩個(gè)W RKY保守結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。前人研究發(fā)現(xiàn),WRKY轉(zhuǎn)錄因子與植物應(yīng)答鹽堿、溫度、離子等脅迫相關(guān),也參與植物的衰老過(guò)程,但是在棉花中已知的參與葉片衰老過(guò)程的WRKY轉(zhuǎn)錄因子卻了解甚少。課題組前期已經(jīng)對(duì)陸地棉WRKY轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行過(guò)比較全面的鑒定及分析,并且測(cè)定了一個(gè)棉花葉片衰老的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù),從中篩選到GhWRKY33基因,該基因在棉花衰老過(guò)程中和干旱脅迫下表達(dá)量顯著上調(diào)�；诖�,本研究從棉花中克隆得到了Gh WRKY33基因,并對(duì)其組織表達(dá)特性、不同誘導(dǎo)條件下的表達(dá)模式進(jìn)行了研究,通過(guò)過(guò)表達(dá)技術(shù)分析并明確基因的功能,獲得主要結(jié)果如下:1.從陸地棉品種中棉所10號(hào)中克隆得到GhWRKY33,其ORF全長(zhǎng)為1533bp,編碼一個(gè)含有510個(gè)含有氨基酸殘基的蛋白,含有兩個(gè)WRKY保守結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)。對(duì)該基因氨基酸序列和進(jìn)化關(guān)系等進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)該基因?qū)儆诘冖耦怶RKY轉(zhuǎn)錄因子家族。2.構(gòu)建了 35S::GhWRKY33-GF... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表及中文對(duì)照
1 引言
    1.1 植物干旱研究進(jìn)展
    1.2 植物衰老研究進(jìn)展
    1.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的分類及生物學(xué)功能
        1.3.1 WRKY參與非生物脅迫
        1.3.2 WRKY參與生物脅迫
        1.3.3 WRKY參與植物生長(zhǎng)發(fā)育
        1.3.4 WRKY參與葉片衰老
    1.4 棉花WRKY轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.4.1 棉花WRKY轉(zhuǎn)錄因子全基因組鑒定
        1.4.2 棉花WRKY轉(zhuǎn)錄因子的功能研究
    1.5 研究目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑、載體及菌株
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 材料的種植與處理
        2.2.2 棉花基因組DNA提取
        2.2.3 棉花總RNA的提取
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        2.2.5 引物設(shè)計(jì)
        2.2.6 GhWRKY33基因的克隆
        2.2.7 GhWRKY33基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.8 載體構(gòu)建
        2.2.9 陽(yáng)性重組子質(zhì)粒提取
        2.2.10 陽(yáng)性重組子轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.11 侵染本氏煙草
        2.2.12 洋蔥表皮細(xì)胞的的預(yù)培養(yǎng)
        2.2.13 GUS染色
        2.2.14 熒光定量PCR
        2.2.15 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.16 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選
        2.2.17 轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型觀察
        2.2.18 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗旱性鑒定及生理指標(biāo)測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 陸地棉GhWRKY33基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.1.1 目的基因的克隆
        3.1.2 GhWRKY33的生物信息學(xué)分析
    3.2 GhWRKY33基因的亞細(xì)胞定位
        3.2.1 目的片段的克隆及載體構(gòu)建
        3.2.2 亞細(xì)胞定位熒光信號(hào)觀察
    3.3 GhWRKY33啟動(dòng)子序列的克隆及分析
        3.3.1 啟動(dòng)子序列的克隆及表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.2 啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)分析和功能預(yù)測(cè)
        3.3.3 啟動(dòng)子的啟動(dòng)活性分析
    3.4 GhWRKY33的表達(dá)模式分析
        3.4.1 GhWRKY33基因的組織特異性表達(dá)分析
        3.4.2 GhWRKY33在干旱和不同激素處理下的表達(dá)分析
    3.5 轉(zhuǎn)GhWRKY33擬南芥的功能分析
        3.5.1 植物過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥中GhWRKY33的表達(dá)分析
        3.5.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗旱性鑒定
        3.5.4 GhWRKY33影響與干旱響應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)
        3.5.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥衰老表型鑒定
        3.5.6 衰老相關(guān)基因的表達(dá)分析
4 討論
    4.1 GhWRKY33通過(guò)激素信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)植物抗旱和衰老
    4.2 GhWRKY33在植物抗旱和衰老中具有重要作用
    4.3 GhWRKY33的鑒定和結(jié)構(gòu)特性分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者簡(jiǎn)歷
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GhWRKY48負(fù)調(diào)控棉花對(duì)大麗輪枝菌的抗性[J]. 劉建芬,雷煜,張振楠,胡廣,唐葉,張寧,司懷軍,吳家和.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2019(05)
[2]棉花WRKY22基因分離及其對(duì)黃萎病的抗性分析[J]. 雷煜,張振楠,胡廣,劉建芬,唐葉,張寧,司懷軍,吳家和.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]陸地棉鹽脅迫應(yīng)答基因GhWRKY41的克隆與分析[J]. 蘇瑩,甄軍波,張曦,王玉美,李樂(lè),華金平.  中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(12)
[4]WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族調(diào)控植物逆境脅迫響應(yīng)[J]. 孫淑豪,余迪求.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(10)
[5]番茄WRKY基因家族的生物信息學(xué)分析[J]. 張紅,姜景彬,許向陽(yáng),李景富.  分子植物育種. 2016(08)
[6]GhWRKY44基因在煙草中遺傳轉(zhuǎn)化及功能分析[J]. 趙曾強(qiáng),韓澤剛,李會(huì)會(huì),李瀟玲,張析,張薇.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2016(01)
[7]桃WRKY基因家族全基因組鑒定和表達(dá)分析[J]. 谷彥冰,冀志蕊,遲福梅,喬壯,徐成楠,張俊祥,周宗山,董慶龍.  遺傳. 2016(03)
[8]Genome-wide analysis of the WRKY transcription factor gene family in Gossypium raimondii and the expression of orthologs in cultivated tetraploid cotton[J]. Caiping Cai,Erli Niu,Hao Du,Liang Zhao,Yue Feng,Wangzhen Guo.  The Crop Journal. 2014(Z1)
[9]氮肥對(duì)新疆棉花產(chǎn)量形成期葉片光合特性的調(diào)節(jié)效應(yīng)[J]. 勾玲,閆潔,韓春麗,趙瑞海,張旺鋒,楊新軍.  植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào). 2004(05)
[10]赤霉素和乙烯對(duì)香菜葉片衰老的影響[J]. 周相娟,姜微波,胡小松,周立剛.  北方園藝. 2003(03)

碩士論文
[1]棉花WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族基因鑒定、表達(dá)分析和WRKY46功能研究[D]. 戴鶴.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3033026