發(fā)布時(shí)間：2021-02-11 23:30

　　生物質(zhì)能是太陽能以化學(xué)能形式儲(chǔ)存在生物質(zhì)中的能量形式,是人類賴以生存的重要能源之一,是僅次于煤炭、石油、天然氣之后的第四大能源。當(dāng)前,由于生物質(zhì)能的可再生性的和無污染性使得世界各國競(jìng)相開發(fā)研究生物質(zhì)能源。目前,能源微生物的研究多停留在篩選野生菌株,也有極少部分利用基因工程技術(shù)來改造菌株使其對(duì)生物質(zhì)有更高的降解效率。如把錳過氧化物酶、木質(zhì)素過氧化物酶等相關(guān)基因轉(zhuǎn)入到畢赤酵母菌或者枯草芽孢桿菌等體內(nèi)制成工程菌株,來降解植物的木質(zhì)素。眾所周知,不管是錳過氧化物酶,還是木質(zhì)素過氧化物酶,都是通過改變細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)來促使酶分解木質(zhì)素、纖維素或者半纖維素。但是,還沒有人嘗試通過構(gòu)建植物活性氧蛋白酶載體,把活性氧相關(guān)基因轉(zhuǎn)入受體菌株,構(gòu)成工程菌株降解生物質(zhì)。本研究嘗試了把植物活性氧蛋白酶基因構(gòu)建載體轉(zhuǎn)入篩選出的合適的野生菌株,成功構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因菌株,并探索調(diào)控植物活性氧代謝的酶降解木質(zhì)素、纖維素以及半纖維素的能力。首先,本研究以生物質(zhì)如腐木、秸稈等為實(shí)驗(yàn)材料,采用愈創(chuàng)木酚法和表型分離法,篩選同降解纖維素、半纖維素或者木質(zhì)素相關(guān)的潛在野生菌株。在該過程中,我們采集南陽師范學(xué)院東區(qū)校園、中區(qū)逸夫樓前... 

【文章來源】：南陽師范學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 生物質(zhì)資源利用現(xiàn)狀
    1.3 生物質(zhì)降解的研究進(jìn)展
        1.3.1 降解生物質(zhì)的微生物類群
        1.3.2 生物質(zhì)降解的相關(guān)酶類
    1.4 篩選生物質(zhì)降解菌的方法
    1.5 應(yīng)用于生物質(zhì)降解的基因工程菌研究進(jìn)展
    1.6 活性氧及其植物相關(guān)的活性氧代謝酶類
    1.7 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.3 常用實(shí)驗(yàn)試劑
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 愈創(chuàng)木酚法篩選木質(zhì)素降解菌
        2.4.2 降解秸稈工程菌受體菌株篩選與鑒定
        2.4.3 受體菌株感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.4.4 引物設(shè)計(jì)及訂購
        2.4.5 轉(zhuǎn)化
        2.4.6 生長曲線
        2.4.7 菌落PCR
        2.4.8 提取質(zhì)粒PCR檢測(cè)
        2.4.9 挑菌培養(yǎng)
        2.4.10 IPTG誘導(dǎo)
        2.4.11 重溶破菌
        2.4.12 SDS-PAGE檢測(cè)表達(dá)蛋白
        2.4.13 Western免疫印跡
        2.4.14 工程菌株對(duì)玉米秸稈的降解性能測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 愈創(chuàng)木酚法篩選木質(zhì)素降解的菌株
    3.2 降解玉米秸稈菌株的篩選
    3.3 1-5菌株的特性分析
    3.4 1-5菌株感受態(tài)的制備
    3.5 轉(zhuǎn)擬南芥活性氧代謝相關(guān)基因1-5轉(zhuǎn)基因菌株的構(gòu)建
    3.6 轉(zhuǎn)基因1-5菌株的鑒定
        3.6.1 菌落PCR與提取質(zhì)粒檢測(cè)
        3.6.2 1-5轉(zhuǎn)基因菌株生長曲線
    3.7 1-5轉(zhuǎn)基因菌株總蛋白的提取和Western印跡
        3.7.1 總蛋白提取
        3.7.2 蛋白純化
    3.8 轉(zhuǎn)基因菌株1-5降解玉米秸稈性能檢測(cè)
        3.8.1 直觀檢測(cè)木質(zhì)纖維素含量變化
        3.8.2 玉米秸稈降解過程中木質(zhì)素等含量變化
4 討論
    4.1 愈創(chuàng)木酚法篩選腐木木質(zhì)素降解菌株條件的優(yōu)化
    4.2 玉米秸稈菌株構(gòu)建的分析
    4.3 玉米秸稈1-5轉(zhuǎn)基因菌株的特性分析
        4.3.1 蛋白表達(dá)分析
        4.3.2 降解秸稈性能分析
    4.4 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3029884