抑制素基因免疫肉牛及免疫應(yīng)答差異基因篩選
發(fā)布時間：2021-02-11 23:03
在激素基因免疫實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),將抑制素基因疫苗免疫大動物,有近一半的個體對抑制素體液免疫沒有產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng),具體原因尚不明晰。本研究利用減毒沙門氏菌為載體的抑制素基因疫苗免疫西門塔爾牛,旨在探討抑制素基因疫苗的促繁殖效果,并篩選與體液免疫反應(yīng)有關(guān)的差異基因,為進(jìn)一步完善抑制素基因免疫技術(shù),提高抑制素基因免疫效果,促進(jìn)其在動物繁殖領(lǐng)域的推廣與應(yīng)用,以及為探討基因免疫應(yīng)答分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下:1.抑制素基因免疫對西門塔爾牛卵泡發(fā)育及受胎的影響選擇41頭西門塔爾牛分為兩組:對照組（n=11）注射10 ml PBS/頭,免疫組（n=30）每頭注射109CFU/ml的抑制素重組菌C501（pVAX-asd-IS）10 ml。以初次免疫為第0天,14天后加強(qiáng)免疫,第28天對未發(fā)情牛用Ovysnch程序進(jìn)行同期發(fā)情-定時人工授精處理,第29天進(jìn)行B超檢測,連續(xù)查6天,每天查一次,記錄卵泡發(fā)育和排卵情況。結(jié)果顯示,肌肉免疫抑制素重組菌C501后4周的抗體陽性率和抗體滴度均顯著高于2周;免疫組大卵泡的數(shù)目（2.46±0.22 vs 1.50±0.29,P<0.0...
【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省
【文章頁數(shù)】：73 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
免疫反應(yīng)路徑（引自Li等[65]
202結(jié)果2.1質(zhì)粒酶切特性將抽提到的pVAX-asd-IS質(zhì)粒經(jīng)HindIII和EcoRI雙酶切后的產(chǎn)物電泳結(jié)果如2-1所示，泳道1和2為pVAX-asd-IS質(zhì)粒經(jīng)HindIII和EcoRI雙酶切，在800bp左右有一條特異性條帶，即為INH片段；泳道3和4為pVAX-asd-IS裸質(zhì)粒電泳，出現(xiàn)兩條帶，結(jié)果顯示提取出目的質(zhì)粒。圖2-1質(zhì)粒pVAX-asd-IS雙酶切產(chǎn)物電泳圖M1：Marker3；泳道1-2：質(zhì)粒pVAX-asd-IS經(jīng)HindIII和EcoRI雙酶切產(chǎn)物；泳道3-4：pVAX-asd-IS裸質(zhì)粒Fig.2-1ElectrophoresisofpVAX-asd-ISgenedigesetedbydoublerestrictionendonucleasesM1：Marker3；Lane1-2:theproductofpVAX-asd-ISplasmiddigesetedwithHindIIIandEcoRI;Lane3-4:pVAX-asd-ISplasmid2.2菌液的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特性利用PCR擴(kuò)增S/INH目的基因，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為845bp（圖2-2），序列大小與目的基因一致；對缺失基因crp進(jìn)行鑒定，缺失菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小為599bp（圖2-3），序列大小與缺失目的基因一致；對缺失基因asd進(jìn)行鑒定，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為315bp（圖2-4），序列大小與缺失目的基因一致；對inVA基因進(jìn)行鑒定，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為580bp（圖2-5），序列大小與目的基因一致。上述結(jié)果表明，該重組菌可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
21圖2-2基因SINH的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖M：AL5000DNAMarker；泳道1-6：SINH基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2-2ElectrophoresisofPCRproductofSINHgeneM:AL5000DNAMarker;Lane1-6:PCRproductofSINHgene圖2-3基因crp的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖M：AL5000DNAMarker；泳道1-2：空白對照；泳道3-4：陰性對照；泳道5-6：缺失菌株擴(kuò)增產(chǎn)物;泳道7-8：野生型菌株擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2-3ElectrophoresisofPCRproductofcrpgeneM：AL5000DNAMarker；Lane1-2：blankcontrol；Lane3-4：negativecontrol；Lane5-6：deletedtypestrainamplificationproduct;Lane7-8：wildtypestrainamplificationproduct
本文編號：3029854
【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省
【文章頁數(shù)】：73 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
免疫反應(yīng)路徑（引自Li等[65]
202結(jié)果2.1質(zhì)粒酶切特性將抽提到的pVAX-asd-IS質(zhì)粒經(jīng)HindIII和EcoRI雙酶切后的產(chǎn)物電泳結(jié)果如2-1所示，泳道1和2為pVAX-asd-IS質(zhì)粒經(jīng)HindIII和EcoRI雙酶切，在800bp左右有一條特異性條帶，即為INH片段；泳道3和4為pVAX-asd-IS裸質(zhì)粒電泳，出現(xiàn)兩條帶，結(jié)果顯示提取出目的質(zhì)粒。圖2-1質(zhì)粒pVAX-asd-IS雙酶切產(chǎn)物電泳圖M1：Marker3；泳道1-2：質(zhì)粒pVAX-asd-IS經(jīng)HindIII和EcoRI雙酶切產(chǎn)物；泳道3-4：pVAX-asd-IS裸質(zhì)粒Fig.2-1ElectrophoresisofpVAX-asd-ISgenedigesetedbydoublerestrictionendonucleasesM1：Marker3；Lane1-2:theproductofpVAX-asd-ISplasmiddigesetedwithHindIIIandEcoRI;Lane3-4:pVAX-asd-ISplasmid2.2菌液的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特性利用PCR擴(kuò)增S/INH目的基因，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為845bp（圖2-2），序列大小與目的基因一致；對缺失基因crp進(jìn)行鑒定，缺失菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小為599bp（圖2-3），序列大小與缺失目的基因一致；對缺失基因asd進(jìn)行鑒定，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為315bp（圖2-4），序列大小與缺失目的基因一致；對inVA基因進(jìn)行鑒定，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為580bp（圖2-5），序列大小與目的基因一致。上述結(jié)果表明，該重組菌可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
21圖2-2基因SINH的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖M：AL5000DNAMarker；泳道1-6：SINH基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2-2ElectrophoresisofPCRproductofSINHgeneM:AL5000DNAMarker;Lane1-6:PCRproductofSINHgene圖2-3基因crp的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖M：AL5000DNAMarker；泳道1-2：空白對照；泳道3-4：陰性對照；泳道5-6：缺失菌株擴(kuò)增產(chǎn)物;泳道7-8：野生型菌株擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2-3ElectrophoresisofPCRproductofcrpgeneM：AL5000DNAMarker；Lane1-2：blankcontrol；Lane3-4：negativecontrol；Lane5-6：deletedtypestrainamplificationproduct;Lane7-8：wildtypestrainamplificationproduct
本文編號：3029854
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