發(fā)布時間：2021-02-09 03:46

　　轉(zhuǎn)基因技術(shù)的廣泛影響以及在商業(yè)化推廣中存在著的潛在風(fēng)險(xiǎn),決定了相關(guān)部門需要對轉(zhuǎn)基因生物及產(chǎn)品進(jìn)行有效跟蹤、監(jiān)控、風(fēng)險(xiǎn)評估和標(biāo)識。我國實(shí)施了對包括大豆、玉米、棉花、油菜和番茄5類轉(zhuǎn)基因作物以及17種產(chǎn)品的強(qiáng)制性定性標(biāo)識制度,而快速準(zhǔn)確高效的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)與方法標(biāo)準(zhǔn)是標(biāo)識制度實(shí)施的技術(shù)前提,是轉(zhuǎn)基因生物及產(chǎn)品安全評價(jià)及管理的基礎(chǔ)。本研究以一種轉(zhuǎn)Cry1Ab基因抗蟲水稻為試驗(yàn)對象,通過引物初步篩選、特異性檢測、退火溫度及引物濃度優(yōu)化、方法檢出限、方法再現(xiàn)性測試和加工品測試等試驗(yàn),分別建立了普通PCR定性檢測方法、實(shí)時熒光定量PCR方法檢測方法和二重微滴式數(shù)字PCR檢測方法。主要研究結(jié)果如下:（1）建立了轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻的普通PCR定性檢測方法:試驗(yàn)最終優(yōu)選的引物組合:上游引物為5’-F4:5’-ATCTGTTTACTCGTCAAGTGTCATCTC-3’,下游引物5’-R1:5’-GCCATGGATTACATATGGCAAGA-3’;最適宜的退火溫度為56℃;引物濃度為0.6μmol/L;檢測限:不低于0.05 ng的抗蟲水稻基因組;方法再現(xiàn)性好,能夠檢出經(jīng)高溫處理含有1%陽性成分的加工品... 

【文章來源】：天津農(nóng)學(xué)院天津市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一章 引言
    1.1 轉(zhuǎn)基因作物的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用
        1.1.2 轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻研究進(jìn)展
        1.1.3 全球轉(zhuǎn)基因作物的產(chǎn)業(yè)化概況
        1.1.4 我國轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)業(yè)化發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.5 轉(zhuǎn)基因生物安全性評價(jià)及其管理
    1.2 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品的檢測方法
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測方法概述
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因植物核酸檢測策略
        1.2.3 轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測
        1.2.4 轉(zhuǎn)基因成分定量PCR檢測
    1.3 研究目的和研究內(nèi)容
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究內(nèi)容
第二章 試驗(yàn)材料和方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品信息
        2.1.2 序列分析及引物設(shè)計(jì)
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 普通PCR定性檢測方法
        2.2.2 實(shí)時熒光定量PCR檢測方法
        2.2.3 二重微滴式數(shù)字PCR檢測方法
第三章 結(jié)果及討論
    3.1 普通PCR定性檢測方法
        3.1.1 反應(yīng)體系、反應(yīng)程序及引物篩選結(jié)果
        3.1.2 特異性檢測
        3.1.3 靈敏度檢測
        3.1.4 退火溫度和引物濃度優(yōu)化結(jié)果
        3.1.5 方法檢出限
        3.1.6 方法再現(xiàn)性測試
        3.1.7 加工品檢測
    3.2 實(shí)時熒光定量PCR檢測方法
        3.2.1 反應(yīng)體系、反應(yīng)程序及引物篩選結(jié)果
        3.2.2 特異性檢測
        3.2.3 引物及探針濃度測試
        3.2.4 方法線性區(qū)間測試
        3.2.5 方法檢出限
        3.2.6 方法再現(xiàn)性測試
        3.2.7 加工品檢測
    3.3 二重微滴式數(shù)字PCR檢測方法
        3.3.1 方法的建立和穩(wěn)定性檢測結(jié)果
        3.3.2 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 條件優(yōu)化
        3.3.4 定量線性范圍試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.5 LOQ驗(yàn)證結(jié)果
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位論文期間發(fā)表的論文



本文編號：3024996