植物的O-甲基轉(zhuǎn)移酶（OMTs）被認為參與了植物次生代謝產(chǎn)物的甲基化,尤其是在苯丙烷類和類黃酮化合物合成途徑,而類黃酮代謝途徑生物合成過程中的酶促反應(yīng)受到轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,有關(guān)中國水仙（Narcissustazettavar.chinensis）轉(zhuǎn)錄因子與花色基因的相互作用鮮有報道。本文重點克隆了中國水仙FOMTs（Flavonol-O-Methyltransferases,類黃酮O-甲基轉(zhuǎn)移酶）基因并進行生物信息學(xué)分析與熒光定量PCR分析,探討了 NtFOMTs基因的特征,并利用酵母單雜交技術(shù)（Yeast-One-Hybrid）建立中國水仙酵母單雜交文庫,通過酵母單雜交實驗篩選出對其有轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄因子,對轉(zhuǎn)錄因子進行分析,以期為研究中國水仙花色基因提供新的借鑒。主要研究結(jié)果如下:1.分離了類黃酮生物合成途徑相關(guān)基因FOMTs:根據(jù)RNA-seq數(shù)據(jù)庫篩選差異表達的中國水仙FOMT基因,共獲得3條基因,采用RT-PCR與RACE技術(shù)相結(jié)合,從水仙中成功克隆出3條FOMTs基因的 cDNA 全長,分別為NtF MT1,NtFOMT2,NtFOMT3,NtFOMT�；騝DNA全長為1... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?Ｒ２Ｒ３－ＭＹＢ對類黃酮生物合成的調(diào)控［６８，７０，７１］??Ｆｉｇ?１－１．?Ｒ２Ｒ３－ＭＹＢ?ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌａｖｏｎｏｉｄ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉ?

??ＭＲ＾／Ｔ２基因ｃＤＮＡ全長為１４０４?ｂｐ，其中５＇?ＵＴＲ長度為３３?ｂｐ?Ｊ?ＵＴＲ長??度為２７９ｂｐ，?ＯＲＦ為１０９２ｂｐ，編碼３６３個氨基酸（圖２－３）。??ＭＦＯＭ７３基因ｃＤＮＡ全長為１２０６?ｂｐ，其中ＹＵＴＲ長度為１１７?ｂｐ，ＯＲＦ為??１０８９?ｂｐ

以中國水仙花瓣基因組ＤＮＡ為模板，擴増得到ＭＦＯＭＤ的基因組序列，與??ｃＤＮＡ序列進行比較后，去除內(nèi)含子部分，克隆得到了類黃酮合成途徑相關(guān)基因??ＦＯＭＴ？的５’端調(diào)控序列（圖３－１?）。??Ｍ?１??７５０?■??圖３－１：?基因５’端調(diào)控序列的克隆??Ｍ：?２０００?Ｍａｋｅｒ；?１：?ＭＦＯＭＴ２基因５’端調(diào)控序列的ＰＣＲ產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?５＇?ｔｅｒｍｉｎａｌ?ｉｎ?ＮｔＦ０ＭＴ２??Ｍ?：?２０００?Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＮｔＦＯＭＴ２?５５?ｔｅｒｍｉｎａｌ??２．２?ＭＦＯＭｒ２基因啟動子順式作用元件分析??將得到的５’端調(diào)控序列提交到在線軟件ＰｌａｎｔＣａｒｅ上進行分析（見圖３－２），??結(jié)果表明中國水仙ＦＯＭＴ２基因啟動子序列除包含必需的起始轉(zhuǎn)錄位點??（ｔｘａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓｔａｒｔｓｉｔｅ，ＴＳＳ）?ＴＡＴＡ－ｂｏｘ、ＣＡＡＴ增強子外，還有ＡＴＣＴ－ｍｏｔｉｆ，??ＡＣＥ，?Ｇ－ｂｏｘ，?Ｓｐｌ等多個光響應(yīng)元件。此外，該啟動子序列還含有真菌誘導(dǎo)子??響應(yīng)元件Ｂｏｘ－Ｗｌ，表達分生組織相關(guān)元件ＣＡＴ－ｂｏｘ，參與茉莉酸甲酯響應(yīng)的順??式調(diào)控元件ＣＧＴＣＡ－ｍｏｔｉｆ、ＴＧＡＣＧ－ｍｏｔｉｆ，?ＭＹＢ參與抗旱誘導(dǎo)的結(jié)合位點ＭＢＳ??元件


本文編號：3023133