發(fā)布時(shí)間：2021-02-07 23:56

　　目的探討UTF1基因在調(diào)控人精原干細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制。方法本研究通過體外培養(yǎng)系統(tǒng)擴(kuò)增人類SSCs,隨后用慢病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的SSCs,借助慢病毒載體上調(diào)、下調(diào)SSCs株中UTF1基因表達(dá),通過Western blot和熒光定量PCR檢測UTF1基因表達(dá)情況,CCK8細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖檢測法以及EDU細(xì)胞周期檢測法檢測各組SSCs活力與增殖情況。最后,應(yīng)用RNA-seq測序分析來明確UTF1基因調(diào)控SSCs增殖的重要信號(hào)通路,并采用Western blot、RT-PCR技術(shù)對(duì)篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果在這項(xiàng)研究中,我們通過免疫磁珠法分離成人睪丸組織中的CD90⁺/CD49f⁺SSC,通過體外培養(yǎng),觀察到SSCs迅速增殖成集落,并表達(dá)CD49f、CD90、UTF1和PLZF等未分化SSCs標(biāo)記物,陽性表達(dá)率>95%,而分化型SSCs標(biāo)記物CD117陽性率<1%。UTF1基因表達(dá)干擾后,發(fā)現(xiàn)UTF1基因過表達(dá)組的SSCs增殖活躍,UTF1基因抑制組的SSCs增殖受阻;細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn),UTF1基因表達(dá)下調(diào)后人SSCs出現(xiàn)G... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Sertoli細(xì)胞培養(yǎng)A，B：培養(yǎng)24小時(shí)后的支持細(xì)胞

Transwell分層的SSCs培養(yǎng)

體外培養(yǎng)的SSC表達(dá)CD49f、CD90、UTF1和PLZF，但不表達(dá)CD117


本文編號(hào)：3023033