本文旨在探討動(dòng)物初情期發(fā)育進(jìn)程中,Grid1基因及其蛋白在雌性大鼠生殖軸上表達(dá)的規(guī)律,以及敲低Grid1基因?qū)Υ菩源笫蟪跚槠诤彤a(chǎn)仔性能的影響,為動(dòng)物初情期調(diào)控提供科學(xué)的理論依據(jù)。首先運(yùn)用RT-qPCR和免疫熒光法分別分析Grid1 mRNA及其蛋白GluD1在不同發(fā)育階段（幼年期、初情期前、初情期和成年期）雌性大鼠生殖軸上的變化;繼而構(gòu)建Grid1慢病毒載體（LV-Grid1）,添加入體外培養(yǎng)的下丘腦神經(jīng)元,RT-qPCR和熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測感染效率和敲低效率以及對(duì)生殖相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響;然后將21d SD大鼠分為3組,即LV-Grid1組、空白對(duì)照和LV-（-）組,側(cè)腦室注射（intracerebroventricular injection,ICV injection）LV-Grid1 于下丘腦,分別于 7d、陰門開啟時(shí)采取下丘腦、垂體、卵巢和血清,采用RT-qPCR檢測敲低效率和生殖相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄變化,ELISA分析血清生殖激素水平及組織學(xué)觀察卵巢結(jié)構(gòu);發(fā)情時(shí)配種,統(tǒng)計(jì)窩產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)和初生體重。所得研究結(jié)果如下:（1）從幼兒期到初情期前,大鼠下丘腦中Grid1 mRNA水平顯著減... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１出生后ＧｎＲＨ神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的發(fā)育ＰＩ

Ｖ＇＃??，鮮，’公１．么３、戰(zhàn)?ｃ＿丨ｇｒｏｕｐ??Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩＣＶ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?一、一??ＬＶ－Ｇｒｉｄｌ??圖１－１側(cè)腦室注射位置及分組??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｇｒｏｕｐｉｎｇ?ｏｆ?ＩＣＶ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ??１．３．４慢病毒載體構(gòu)建??Ｇｒｉｄｌ慢病毒載體（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ?ｖｅｃｔｏｒ－Ｇｒｉｄｌ，?ＬＶ－Ｇｒｉｄｌ）有上海吉瑪制藥技術(shù)有??限公司構(gòu)建，ｓｉＲＮＡ－Ｇｒｉｄｌ?序列為：５’?ＧＣＡＣＡＴＣＣＣＡＣＡＣＣＴＣＴＴＴ－３，，獲得慢??病毒滴度為ｌｘｌ０９ＴＵ／ｍＬ。??１．３．５組織樣品處理及采集??（１）對(duì)飼養(yǎng)至１０ｄ，初情期前（２８ｄ），初情期，成年間情期大鼠，以及側(cè)??腦室注射后７ｄ大鼠，陰門開啟大鼠，ＬＶ－Ｇｒｉｄｌ組陰門開啟而空白對(duì)照及ＬＶ－（－）??組匹配同日齡的大鼠做以下處理：??①采血：頸部脫臼，斷頸采血２ｍＬ，?４°Ｃ靜置４ｈ，?３０００ｒ／ｍｉｎ離心１５ｍｉｎ，??血清以７（＾Ｌ每管分裝后置于－２０°Ｃ保存，用于檢測血清中ＧｌｕＤｌ，?Ｅ２，?Ｐ４，?ＦＳＨ，??ＬＨ的濃度。??②取材：將鋁盒內(nèi)高壓滅菌的手術(shù)器械置于ＤＥＰＣ水中浸泡３０ｍｉｎ，置于超??凈臺(tái)中。大鼠迅速斷頭處理，用７５％酒精將全身皮膚消毒后迅速置于超凈臺(tái)中。??取材者與超凈臺(tái)靠近酒精燈處剪開頭部皮膚，利用剪刀打開顱骨取出下丘腦（位??于大腦腹面、丘腦的下方）、垂體、卵巢放置于做好標(biāo)記的凍存管中，快速放入??液氮中。隨后剪開腹部皮膚和肌肉，摘取卵巢稱重，其中一側(cè)卵巢快速放入凍存??管置于液氮中，另－？側(cè)卵巢用游標(biāo)卡尺測量橫徑、縱徑、橫周長、縱周

２結(jié)果??２．１?在雌性大鼠生殖軸上的表達(dá)??２．１．１?ｍＲＮＡ在雌性大鼠生殖軸上的表達(dá)??不同發(fā)育階段的雌性大鼠下丘腦、垂體均有Ｇｒ／心ｍＲＮＡ的表達(dá)（圖２－１），??而卵巢上沒有檢測出。在下丘腦（圖２－１Ａ），?Ｇｒ／Ｖ＂ｍＲＮＡ在初情期前、初情期??和成年期大鼠顯著低于幼兒期（Ｐ＜０．０５），且初情期前大鼠顯著低于初情期和成??年期（Ｐ＜０．０５），初情期和成年期間差異均不顯著（Ｐ＞０．０５）；在垂體（圖２－１Ｂ），??Ｇｒ／ＷｍＲＮＡ隨著大鼠的發(fā)育逐漸降低，初情期前、初情期和成年期顯著低于幼??兒期（Ｐ＜０．０５），成年期顯著低于初情期前（＾＜０．０５），但初情期前和初情期??（７＾０．０５），初情期和成年期（／＾Ｏ．Ｏ〗）均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。卵巢上未檢測出（附??圖?Ａ１）。??Ａ?Ｂ??Ｉ?ｉ??１?＊?ｉ??５?１５１?Ｉ￣；?Ｉ?５１５１?＊??５?Ｉ￣１?１?ａ?＿￡?Ｉ??ｉｒｏ＇?１—￣＾Ｔ１１—！?１１〇－?＾?＇?＊?１??１、，／?／?／?ｉ、，／?／?＃??圖２－１雌性大鼠初情期發(fā)育進(jìn)程中下丘腦（Ａ）和垂體（Ｂ）?Ｇｒｉｄｌ?ｍＲＮＡ表達(dá)水平??Ｆｉｇ．２－１?Ｇｒｉｄ！?ｍＲＮ?Ａ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ?（Ａ）?ａｎｄ?ｐｉｔｕｉｔａｒｖ－?（Ｂ）?ｉｎ?ｄｕｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ｐｕｂｅｒｔｙ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｆｅｍａｌｅ?ｒａｔｓ．??Ａ：?Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．?Ｂ：?Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ．??２．１．２?ＧＩｕＤｌ在雌性大鼠生殖軸上的分布??采用免疫熒光與熒光顯微鏡結(jié)合

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3019246