卵形鯧鲹TLR3信號(hào)通路相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析
發(fā)布時(shí)間：2021-02-05 00:09
先天免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御病原入侵的第一道保護(hù)屏障,其發(fā)揮作用依賴于PRRs對(duì)PAMPs的識(shí)別。TLRs是PRRs中一個(gè)重要家族,屬于I型跨膜蛋白,通過識(shí)別不同的PAMPs,激活依賴MyD88或TRIF信號(hào)通路。TRIF信號(hào)通路始于TLR3識(shí)別PAMPs,隨后募集并活化銜接蛋白TRIF,激活TBK1促使IRF3/7磷酸化,誘導(dǎo)IFN-β表達(dá)。活化的TRIF還可招募TRAF6,激活NF-κB,上調(diào)促炎細(xì)胞因子的表達(dá)水平,發(fā)揮免疫效應(yīng)。卵形鯧鰺是我國(guó)南方地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖品種,隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,導(dǎo)致傳染性疾病多發(fā),嚴(yán)重影響著卵形鯧鰺養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。鑒于TLR3信號(hào)通路在先天免疫中的重要作用,開展卵形鯧鲹TLR3鲹（TroTLR3）及其信號(hào)通路相關(guān)基因（TroTRIF、TroTRAF6和TroTBK1）的研究,將為病害防治以及抗病品種選育提供理論支撐。本研究獲得了TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因的全長(zhǎng)cDNA,應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)上述基因的功能位點(diǎn)、三維結(jié)構(gòu);分析遺傳進(jìn)化規(guī)律;檢測(cè)其在健康魚體組織中的表達(dá)模式;探討刺激條件下,免疫相關(guān)組織和非免疫相關(guān)組織中4個(gè)基因的表達(dá)規(guī)律;構(gòu)建了4個(gè)基因的原核...
【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 TLRS的分類、定位及配體
2 TLR3及其信號(hào)通路
2.1 TLR3的分子結(jié)構(gòu)
2.2 TLR3的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
3 TLR3信號(hào)通路相關(guān)分子的研究進(jìn)展
3.1 TLR3
3.2 TRIF
3.3 TRAF6
3.4 TBK1
4 卵形鯧鲹分子免疫的研究進(jìn)展
5 研究目的與意義
第二章 TroTLR3及TroTRIF基因的克隆與免疫應(yīng)答初步研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
2.2 試劑與耗材
2.3 實(shí)驗(yàn)魚處理與菌株
2.4 TroTLR3及TroTRIF基因全長(zhǎng)cDNA克隆
2.5 TroTLR3及TroTRIF基因的生物信息學(xué)分析
2.6 TroTLR3及TroTRIF基因的免疫應(yīng)答初步研究
3 結(jié)果
3.1 總RNA提取樣品質(zhì)量檢測(cè)
3.2 TroTLR3及TroTRIF基因cDNA全長(zhǎng)序列分析
3.3 同源性及進(jìn)化分析
3.4 蛋白結(jié)構(gòu)域比較
3.5 蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
3.6 不同脊椎動(dòng)物TLR3和TRIF蛋白序列比較分析
3.7 TroTLR3及TroTRIF基因在正常組中的分布情況
3.8 LPS刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在組織中的表達(dá)變化
3.9 polyI:C刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在組織中的表達(dá)變化
3.10 溶藻弧菌刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在組織中的表達(dá)變化
4 討論
4.1 TroTLR3和TroTRIF的序列特征
4.2 TroTLR3和TroTRIF基因在健康組織中的表達(dá)模式
4.3 刺激條件下TroTLR3和TroTRIF基因的表達(dá)變化
第三章 TroTLR3信號(hào)通路下游分子TroTRAF6和TroTBK1基因的克隆與免疫應(yīng)答初步研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
2.2 試劑與耗材
2.3 實(shí)驗(yàn)魚與菌株
2.4 TroTRAF6及TroTBK1基因全長(zhǎng)cDNA克隆
2.5 TroTRAF6及TroTBK1基因的生物信息學(xué)分析
2.6 TroTRAF6及TroTBK1基因的免疫應(yīng)答初步研究
3 結(jié)果
3.1 TroTRAF6及TroTBK1基因cDNA全長(zhǎng)序列分析
3.2 同源性及進(jìn)化分析
3.3 蛋白結(jié)構(gòu)域比較
3.4 蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
3.5 不同脊椎動(dòng)物TRAF6和TBK1蛋白序列比較分析
3.6 TroTRAF6和TroTBK1基因在正常組中的分布情況
3.7 LPS刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
3.8 polyI:C刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
3.9 溶藻弧菌刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
4 討論
4.1 TroTRAF6和TroTBK1基因的序列特征
4.2 TroTRAF6和TroTBK1基因在健康組織中的表達(dá)模式
4.3 刺激條件下Tro TRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
第四章 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因原核、真核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建
1 前言
2 材料與方法
2.1 主要儀器
2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
2.3 菌株和質(zhì)粒
2.4 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因ORF的克隆
2.5 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
2.6 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
2.7 原核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
3 結(jié)果與分析
3.1 TroTLR3及其相關(guān)基因ORF的擴(kuò)增與克隆
3.2 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
3.3 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
3.4 原核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
4 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Molecular Characterization, Expression Profiles, and Immunostimulation Responses of TRAF6 and TAK1 in Japanese Flounder（Paralichthys olivaceus）[J]. ZHAO Haitao,CHEN Yan,WANG Zhigang,ZHANG Quanqi,YU Haiyang. Journal of Ocean University of China. 2019(01)
[2]赤眼鱒TRIF基因cDNA克隆及其組織表達(dá)分析[J]. 徐瑩,李耀國(guó),王榮華,劉巧林,王靜安,趙鑫,肖調(diào)義. 湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào). 2018(02)
[3]pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)鑒定[J]. 馬榮,肖婷,李瑾,孫慧,徐超,黃炳成,尹昆,趙桂華,崔勇,朱嵩,劉功振,閆歌,魏慶寬. 中國(guó)血吸蟲病防治雜志. 2018(02)
[4]廣西北部灣大宗海水養(yǎng)殖魚類卵形鯧鲹感染溶藻弧菌及其致病性研究[J]. 余慶,李菲,王一兵,覃仙玲,陳憲云,吳柳瑩,李鵬飛. 廣西科學(xué). 2018(01)
[5]TLR3信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J]. 陸天明,許慶梅,馬樂. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2017(52)
[6]赤眼鱒TRAF6基因的cDNA克隆及其應(yīng)對(duì)GCRV的免疫表達(dá)特性[J]. 陳開健,王靜安,劉巧林,王榮華,徐瑩,趙鑫,肖調(diào)義. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[7]赤眼鱒Toll樣受體3基因cDNA全長(zhǎng)克隆及表達(dá)分析[J]. 肖調(diào)義,李偉,王榮華,劉巧林,彭慧珍,蘇建明. 水生生物學(xué)報(bào). 2016(05)
[8]鴨TLR3基因胞外區(qū)的原核表達(dá)及抗體制備[J]. 宋凱杰,陳宗艷,黃云秀,李傳峰,孟春春,李丹丹,張淼濤,劉光清. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2015(05)
[9]半滑舌鰨TRAF6基因和TAK1基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 陳燕,樊琳,劉田田,劉躍中,李贊,張全啟. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2015(05)
[10]南海區(qū)卵形鯧鲹遺傳多樣性的研究[J]. 趙永貞,陳秀荔,李詠梅,彭敏,楊春玲,韋嬪媛,彭金霞,陳曉漢. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(04)
博士論文
[1]斜帶石斑魚TLR1、TLR2和MyD88基因的克隆與免疫應(yīng)答研究[D]. 韋友傳.廣西大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3019156
【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
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摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 TLRS的分類、定位及配體
2 TLR3及其信號(hào)通路
2.1 TLR3的分子結(jié)構(gòu)
2.2 TLR3的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
3 TLR3信號(hào)通路相關(guān)分子的研究進(jìn)展
3.1 TLR3
3.2 TRIF
3.3 TRAF6
3.4 TBK1
4 卵形鯧鲹分子免疫的研究進(jìn)展
5 研究目的與意義
第二章 TroTLR3及TroTRIF基因的克隆與免疫應(yīng)答初步研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
2.2 試劑與耗材
2.3 實(shí)驗(yàn)魚處理與菌株
2.4 TroTLR3及TroTRIF基因全長(zhǎng)cDNA克隆
2.5 TroTLR3及TroTRIF基因的生物信息學(xué)分析
2.6 TroTLR3及TroTRIF基因的免疫應(yīng)答初步研究
3 結(jié)果
3.1 總RNA提取樣品質(zhì)量檢測(cè)
3.2 TroTLR3及TroTRIF基因cDNA全長(zhǎng)序列分析
3.3 同源性及進(jìn)化分析
3.4 蛋白結(jié)構(gòu)域比較
3.5 蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
3.6 不同脊椎動(dòng)物TLR3和TRIF蛋白序列比較分析
3.7 TroTLR3及TroTRIF基因在正常組中的分布情況
3.8 LPS刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在組織中的表達(dá)變化
3.9 polyI:C刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在組織中的表達(dá)變化
3.10 溶藻弧菌刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在組織中的表達(dá)變化
4 討論
4.1 TroTLR3和TroTRIF的序列特征
4.2 TroTLR3和TroTRIF基因在健康組織中的表達(dá)模式
4.3 刺激條件下TroTLR3和TroTRIF基因的表達(dá)變化
第三章 TroTLR3信號(hào)通路下游分子TroTRAF6和TroTBK1基因的克隆與免疫應(yīng)答初步研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
2.2 試劑與耗材
2.3 實(shí)驗(yàn)魚與菌株
2.4 TroTRAF6及TroTBK1基因全長(zhǎng)cDNA克隆
2.5 TroTRAF6及TroTBK1基因的生物信息學(xué)分析
2.6 TroTRAF6及TroTBK1基因的免疫應(yīng)答初步研究
3 結(jié)果
3.1 TroTRAF6及TroTBK1基因cDNA全長(zhǎng)序列分析
3.2 同源性及進(jìn)化分析
3.3 蛋白結(jié)構(gòu)域比較
3.4 蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
3.5 不同脊椎動(dòng)物TRAF6和TBK1蛋白序列比較分析
3.6 TroTRAF6和TroTBK1基因在正常組中的分布情況
3.7 LPS刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
3.8 polyI:C刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
3.9 溶藻弧菌刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
4 討論
4.1 TroTRAF6和TroTBK1基因的序列特征
4.2 TroTRAF6和TroTBK1基因在健康組織中的表達(dá)模式
4.3 刺激條件下Tro TRAF6和TroTBK1基因在組織中的表達(dá)變化
第四章 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因原核、真核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建
1 前言
2 材料與方法
2.1 主要儀器
2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
2.3 菌株和質(zhì)粒
2.4 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因ORF的克隆
2.5 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
2.6 TroTLR3信號(hào)通路相關(guān)基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
2.7 原核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
3 結(jié)果與分析
3.1 TroTLR3及其相關(guān)基因ORF的擴(kuò)增與克隆
3.2 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
3.3 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
3.4 原核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
4 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Molecular Characterization, Expression Profiles, and Immunostimulation Responses of TRAF6 and TAK1 in Japanese Flounder（Paralichthys olivaceus）[J]. ZHAO Haitao,CHEN Yan,WANG Zhigang,ZHANG Quanqi,YU Haiyang. Journal of Ocean University of China. 2019(01)
[2]赤眼鱒TRIF基因cDNA克隆及其組織表達(dá)分析[J]. 徐瑩,李耀國(guó),王榮華,劉巧林,王靜安,趙鑫,肖調(diào)義. 湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào). 2018(02)
[3]pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)鑒定[J]. 馬榮,肖婷,李瑾,孫慧,徐超,黃炳成,尹昆,趙桂華,崔勇,朱嵩,劉功振,閆歌,魏慶寬. 中國(guó)血吸蟲病防治雜志. 2018(02)
[4]廣西北部灣大宗海水養(yǎng)殖魚類卵形鯧鲹感染溶藻弧菌及其致病性研究[J]. 余慶,李菲,王一兵,覃仙玲,陳憲云,吳柳瑩,李鵬飛. 廣西科學(xué). 2018(01)
[5]TLR3信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J]. 陸天明,許慶梅,馬樂. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2017(52)
[6]赤眼鱒TRAF6基因的cDNA克隆及其應(yīng)對(duì)GCRV的免疫表達(dá)特性[J]. 陳開健,王靜安,劉巧林,王榮華,徐瑩,趙鑫,肖調(diào)義. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[7]赤眼鱒Toll樣受體3基因cDNA全長(zhǎng)克隆及表達(dá)分析[J]. 肖調(diào)義,李偉,王榮華,劉巧林,彭慧珍,蘇建明. 水生生物學(xué)報(bào). 2016(05)
[8]鴨TLR3基因胞外區(qū)的原核表達(dá)及抗體制備[J]. 宋凱杰,陳宗艷,黃云秀,李傳峰,孟春春,李丹丹,張淼濤,劉光清. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2015(05)
[9]半滑舌鰨TRAF6基因和TAK1基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 陳燕,樊琳,劉田田,劉躍中,李贊,張全啟. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2015(05)
[10]南海區(qū)卵形鯧鲹遺傳多樣性的研究[J]. 趙永貞,陳秀荔,李詠梅,彭敏,楊春玲,韋嬪媛,彭金霞,陳曉漢. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(04)
博士論文
[1]斜帶石斑魚TLR1、TLR2和MyD88基因的克隆與免疫應(yīng)答研究[D]. 韋友傳.廣西大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3019156
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