為尾葉桉GLU4無性系（Eucalyptus urophylla clone GLU4）肉桂酰乙醇脫氫酶基因（EuCAD）調(diào)控其木質(zhì)素的合成提供技術(shù)參考,以模式植物煙草為試驗材料,采用生物信息學技術(shù)分析其EuCAD基因序列,根據(jù)保守結(jié)構(gòu)域的分布情況選擇EuCAD基因不同位置的4個片段（S₁、S₂、S₃和S₄）分別構(gòu)建RNA干擾載體并轉(zhuǎn)化煙草后獲得轉(zhuǎn)基因煙草植株（pS₁、pS₂、pS₃和pS₄）,檢測分析轉(zhuǎn)基因煙草植株中CAD基因表達水平、莖部解剖結(jié)構(gòu)、木質(zhì)素及纖維素的含量變化。結(jié)果表明:S₁和S₂片段對木質(zhì)素的調(diào)控效果最明顯,其轉(zhuǎn)基因煙草植株pS₁和pS₂的基因表達水平分別較野生型降低87.48%和87.30%,木質(zhì)素含量較野生型降低15.26%和11.44%;S₃和S₄片段的調(diào)控效... 

【文章來源】：貴州農(nóng)業(yè)科學. 2020,48(09)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

RNAi載體構(gòu)建轉(zhuǎn)化菌落的PCR驗證

從圖2可見，RNAi載體轉(zhuǎn)化獲得的4個轉(zhuǎn)基因煙草植株基因組上插入RNAi載體的轉(zhuǎn)基因植株中可檢測到長度200bp的特異性片段，而未整合RNAi載體的植株則未擴增到目標條帶。陽性植株經(jīng)進一步PCR擴增產(chǎn)物測序結(jié)果顯示，其序列與目標RNAi序列一致，獲得的轉(zhuǎn)基因煙草植株分別命名為pS1、pS2、pS3和pS4。2.3 轉(zhuǎn)基因煙草植株CAD基因的表達水平

從圖3看出，pS1、pS2、pS3和pS44個轉(zhuǎn)基因煙草植株的CAD基因表達水平與野生型（WT）相比，均呈顯著下降趨勢，pS1與pS2間差異不顯著，pS1和pS2顯著低于pS3和pS4,pS3顯著低于pS4。其中，pS1和pS2降幅最大，分別為87.48%和87.30%;pS3降幅其次，為67.93%;pS4降幅最小，為49.70%。從基因表達調(diào)控效果看，RNAi片段S1和S2的調(diào)控效果最好。2.4 轉(zhuǎn)基因煙草植株莖部直徑及木質(zhì)部的厚度

【參考文獻】：
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本文編號：3015499