發(fā)布時間：2021-01-31 08:30

　　微塑料及抗性基因?qū)λh(huán)境的污染是全球關(guān)注的熱點,微塑料特異性的表面結(jié)構(gòu),可能成為潛在致病菌和抗性基因傳播的潛在匯,抗生素和金屬的脅迫作用可能會加劇抗性基因的傳播。本研究利用水-沉積物微宇宙模擬系統(tǒng)研究兩種常見抗生素磺胺甲惡唑（SMX）和四環(huán)素以及金屬鋅（Zn）在低、中、高脅迫水平作用下,水環(huán)境中兩種常檢出微塑料聚乙烯（PE）和聚苯乙烯（PS）的生物膜上相應(yīng)抗生素抗性基因（ARGs）、金屬抗性基因（MRGs）和細菌群落的演化特征及其關(guān)聯(lián)性,從而探明微塑料對抗性基因傳播的潛在影響。研究主要結(jié)果和結(jié)論如下:（1）利用16S rRNA高通量測序研究抗生素和金屬脅迫下,微塑料生物膜上細菌群落變化特征及其與天然基體（石英砂）的差異性,結(jié)果表明:微塑料生物膜細菌群落多樣性高于天然基體但兩者無顯著性差異,在變形桿菌門、厚壁菌門和Parcubacteria上微塑料生物膜和天然基體生物膜存在顯著性的差異�？股睾徒饘賳为毣蚵�(lián)合處理下微塑料生物膜細菌群落結(jié)構(gòu)存在極為顯著差異（R²=0.730,p<0.01）,而細菌群落隨時間變化則無顯著差異（R²=0.124... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

實驗1：多重選擇壓力因子對微塑料生物膜的ARGs和MRGs的影響

合肥工業(yè)大學碩士學位論文12圖2.2實驗2：磺胺甲惡唑?qū)E和PS微塑料生物膜ARGs的影響。Fig2.2experiment2:EffectsofSMXonARGsofthePEandPSbiofilm.2.2.3抗生素分析實驗一共檢測了兩種抗生素（SMX和TC），抗生素測定方法主要參照Liu等[83]的方法，從水-沉積物系統(tǒng)的水相部分取適量水樣，將水樣用0.75μm玻璃纖維濾膜（Whatman,UK）過濾去除雜質(zhì)的影響，過濾后的水樣裝入樣品瓶中用超純水稀釋。使用H2SO4（30%，V/V）將水樣的pH值調(diào)為3，再向水樣中加入0.2gNa2EDTA，用以消除Ca2+和Mg2+的干擾。最后向每個樣品中加入抗生素內(nèi)標物混合液使其最終1mL體積中濃度為50μg/L，所有水樣一式三份。水樣中抗生素富集通過OasisHydrophile-LipophileBalance(HLB)小柱（200mg,6mL,Waters,US），首先分別用5mL甲醇和5mL超純水活化OasisHLB固相萃取柱，活化后開始上樣，控制上樣速度在5-10mL/min。上樣完成后，再用5mL超純水淋洗OasisHLB固相萃取柱去除雜質(zhì)，再用負壓抽干小柱約10min，重復使用3mL甲醇/丙酮溶液（85:15，V/V）將抗生素洗脫出，在氮氣條件下干燥洗脫液。含有抗生素的萃取物再用1mL乙腈/0.1%甲酸水混合溶液（5:95,V/V）復溶，渦旋混合、超聲。最后，過0.22μmPTFE濾頭于進樣瓶中，置于-20°C保存待測。預處理的樣品采用Agilent1290液相色譜儀串聯(lián)Agilent6460三重四極桿質(zhì)譜儀（RRLC-MS/MS）對抗生素進行定量分析。儀器檢測過程中所使用的色譜柱為AgilentZorbaxEclipseplus-C18柱(RRHD，100×2.1mm，1.8μm)，柱溫為35°C。流動相是含有0.1%甲酸的超純水（流動相A）和乙腈（流動相B），流速設(shè)置為0.3mL/min，進樣的體積為10μL。系統(tǒng)梯度洗脫程序設(shè)置為：流動相B的初始比例為5%，保持1min，在2min內(nèi)線性增加到20%，用1.5min從20%增?

第三章微塑料生物膜細菌群落豐度與多樣性21圖3.1微塑料（PE）和天然基體生物膜細菌群落結(jié)構(gòu)比較。（a）細菌群落在門水平上的分布，（b）Wilcox秩和檢驗（Wilcoxonrank-sumtest）對細菌群落top15物種進行差異分析（*p<0.05,**p<0.01）Fig3.1ComparisonofbacterialcommunitystructurebetweenMP(PE)andNSbiofilms.(a)distributionofbacteriaphyla,(b)Wilcoxonrank-sumtestwasusedtocomparethetop15speciesofbacteriaphyla(*p<0.05,**p<0.01).為了進一步了解微塑料和天然基體生物膜中“核心”群落成員，進行了生物標志物分析。LEfSe采用非參數(shù)因子克魯斯卡爾—沃利斯秩和驗檢（non-parametricfactorialKruskal-Wallis(KW)sum-ranktest）檢測具有顯著物種豐度差異特征，并找到與豐度有顯著性差異的類群，最后采用線性判別分析（LDA）來估算每個物種豐度對差異效果影響的大小，本節(jié)中LDA的閾值設(shè)為3.5。如圖3.2所示，在門水平，厚壁菌門（Firmicutes）和Parcubacteria分別為微塑料生物膜和天然基體生物膜的生物標志物，其中厚壁菌門（Firmicutes）常被認為是抗生素的主要生產(chǎn)NS

【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗生素的水體賦存、毒性及風險[J]. 劉曉暉,王煒亮,國曉春,盧少勇.  給水排水. 2015(12)

博士論文
[1]長江口濱岸水環(huán)境中抗生素抗性基因的賦存特征[D]. 郭行磐.華東師范大學 2019

碩士論文
[1]太湖水體中微塑料與抗生素的時空分布及其對羅非魚的聯(lián)合效應(yīng)研究[D]. 張閃閃.江南大學 2019
[2]冬季太湖兩類抗生素抗性基因分布特征[D]. 薛校風.南京師范大學 2019



本文編號：3010533