目的:探討生長激素缺乏狀態(tài)下通過降低肝細(xì)胞β氧化功能加重肝細(xì)胞脂肪沉積及其可能的機(jī)制方法:構(gòu)建生長激素受體（growth hormone receptor,GHR）慢病毒干擾載體下調(diào)GHR表達(dá),用不同濃度的棕櫚酸（Palmic acid,PA）及胰島素樣生長因子 1（insulin like growth factor,IGF-1）干預(yù) L02 細(xì)胞 24h,采用油紅O染色法觀察細(xì)胞內(nèi)甘油三酯沉積情況,蛋白免疫印跡（Western blot）、實時熒光定量 PCR（Real-time quantitative PCR）檢測 PA 及 IGF-1干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)線粒體β氧化標(biāo)志基因及TTC39B基因的表達(dá)變化。結(jié)果:1.PA刺激兩組細(xì)胞后,轉(zhuǎn)染組肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積與對照組相比增多。2.隨著PA濃度的升高,β氧化相關(guān)基因的表達(dá)逐漸降低,在相同PA濃度下,轉(zhuǎn)染組與對照組相比皆明顯降低;TTC39BmRNA和蛋白水平表達(dá)逐漸升高,與對照組相比較,在高濃度PA水平呈明顯升高。3.經(jīng)400ummol/L PA與不同濃度的IGF-1共同干預(yù)24h后,轉(zhuǎn)染組肝細(xì)胞隨著IGF-1濃度的升高,β氧化相關(guān)基因的表達(dá)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：重組慢病毒轉(zhuǎn)染Ｌ０２細(xì)胞抑制ＧＨＲ表達(dá)??

?重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???２．２不同濃度ＰＡ對Ｌ０２細(xì)胞基因表達(dá)及油紅Ｏ染色的影響??實時ＰＣＲ檢測發(fā)現(xiàn)，用不同濃度ＰＡ干預(yù)轉(zhuǎn)染組及陰性對照組細(xì)胞２４ｈ，隨著??ＰＡ濃度的升高，兩組細(xì)胞的線粒體卩氧化相關(guān)基因ｍＲＮＡＰＰＡＲａ、ＣＰＴ１Ａ、ＦＧＦ２１表??達(dá)降低，ＴＴＣ３９Ｂ表達(dá)增加ＯＣ０．０５）?；?Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡檢測也有同樣的發(fā)現(xiàn)（ＰＣ０．０５）。??同時，油紅０染色發(fā)現(xiàn)，經(jīng)ＰＡ處理后，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯沉積較對照組增多。??（Ａ）?（Ｂ）??

?重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｗａｓ?ｕｓｅｄ?ｔｏ?ｏｂｓｅｒｖｅ?ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ?ｉｎｓｉｄｅ?ｔｈｅ?ｃｅｌｌ．?Ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ?ｗｅｒｅ?ｉｎ?ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ．?＊Ｐ?＜０．０５??ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?０?ｍｍｏｌ／１?ｉｎ?ｓｈＳｃｒ?ｇｒｏｕｐ．?＃Ｐ?＜０．０５?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?０?ｍｍｏｌ／１?ｉｎ?ｓｈＧＨＲ?ｇｒｏｕｐ．?ｒ＾Ｐ??＜０．０５?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｅａｃｈ?ｏｔｈｅｒ?ａｔ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ＰＡ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．??２．３不同濃度ＩＧＦ－ｌ對Ｌ０２細(xì)胞基因表達(dá)及油紅Ｏ染色的影響??實時ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡檢測檢發(fā)現(xiàn)，用不同濃度ＩＧＦ－１和一定濃度ＰＡ共同干??預(yù)轉(zhuǎn)染組及陰性對照組細(xì)胞２４ｈ，隨著ＩＧＦ－１濃度的升高，兩組細(xì)胞的線粒體卩氧化??相關(guān)基因ｍＲＮＡＰＰＡＲａ、ＣＰＴ１Ａ、ＦＧＦ２１表達(dá)增加，ＴＴＣ３９Ｂ表達(dá)減少ＯＣ０．０５）。??同時，油紅０染色發(fā)現(xiàn)，經(jīng)ＩＧＦ－１處理后，兩組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯沉積減少。??（Ａ）?ＣＢ）??


本文編號：3007935