發(fā)布時(shí)間：2021-01-27 11:44

　　粘蟲(chóng)Mythimna separata（Walker）是一種遷飛性、多食性、暴發(fā)性的世界性害蟲(chóng),其已對(duì)多種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了抗性。本文以玉米粘蟲(chóng)為研究對(duì)象,經(jīng)過(guò)氯蟲(chóng)苯甲酰胺或氟蟲(chóng)腈處理粘蟲(chóng)3齡幼蟲(chóng)24 h后,構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)并進(jìn)行Illumina RNA-seq測(cè)序,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）篩選出不同條件下最佳的內(nèi)參基因及差異性表達(dá)的P450基因,并通過(guò)RNA干擾（RNAi）技術(shù)確定對(duì)殺蟲(chóng)劑具有解毒代謝功能的主效P450基因。具體研究結(jié)果如下:1.采用葉片浸漬法測(cè)定氯蟲(chóng)苯甲酰胺或氟蟲(chóng)腈對(duì)粘蟲(chóng)的毒力。結(jié)果表明氯蟲(chóng)苯甲酰胺或氟蟲(chóng)腈對(duì)粘蟲(chóng)3齡幼蟲(chóng)致死中濃度LC₅₀分別為0.45和18.72 mg/L,對(duì)粘蟲(chóng)3齡幼蟲(chóng)的10%致死濃度LC₁₀分別為0.15和13.66 mg/L。2.分別用氯蟲(chóng)苯甲酰胺(LC₁₀)或氟蟲(chóng)腈(LC₁₀)處理粘蟲(chóng)3齡幼蟲(chóng)24 h后,通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)并進(jìn)行Illumina RNA-seq測(cè)序。結(jié)果表明,氯蟲(chóng)苯甲酰胺處理粘蟲(chóng)后,共有29個(gè)P450基因表達(dá)量上調(diào),27個(gè)P45... 

【文章來(lái)源】：河南科技學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Unigenes長(zhǎng)度分布柱狀圖

第三章粘蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及P450基因篩選15Unigenes，總長(zhǎng)度為97934563bp，最小長(zhǎng)度為201bp，最大長(zhǎng)度為30776bp，平均長(zhǎng)度為806bp，拼接所得轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度分布如圖3-1，圖3-2。圖3-1Unigenes長(zhǎng)度分布柱狀圖Fig3-1Unigeneslengthbar圖3-2Unigenes長(zhǎng)度頻率分布圖Fig3-2ThegraphofUnigeneslengthfrenquency將粘蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組拼接得到的Unigenes通過(guò)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)NR與家蠶（Bombyxmori）、小家鼠（Musmusculus）、黑脈金斑蝶（Danausplexippus）、棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpaarmigera）和小菜蛾（Plutellaxylostella）進(jìn)行比對(duì)，Unigenes的同源相似比例分別為43.3%、15.9%、2.3%和15.1%（圖3-3）。

粘蟲(chóng)對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺抗性相關(guān)細(xì)胞色素P450的鑒定16圖3-3Unigene的同源基因百分比Fig3-3ThepercentageofhomologousgenesofUnigene將粘蟲(chóng)得到的Unigenes與NR、NT、PFAM、KOG、Swiss-Prot、KO和GO七大數(shù)據(jù)庫(kù)分別進(jìn)行蛋白序列、核酸序列、蛋白結(jié)構(gòu)域、直系同源關(guān)系、表達(dá)產(chǎn)物代謝途徑及功能注釋，注釋所占比例分別為43.01%、21.76%、33.55%、17.91%、30.49%、18.47%和33.87%（圖3-4）。圖3-4Unigenes的七大數(shù)據(jù)庫(kù)注釋比例Fig3-4TheratesofUnigenesannotationwithsevendatabases將被七大數(shù)據(jù)庫(kù)注釋后的Unigenes進(jìn)行基因差異表達(dá)分析，其中橫坐標(biāo)是指基因在不同實(shí)驗(yàn)組中/不同樣品中表達(dá)倍數(shù)變化，縱坐標(biāo)指基因表達(dá)量變化的顯著程度，qvalue

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]CYP6BG1和UGT33AA4介導(dǎo)的小菜蛾對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺抗性的分子機(jī)制[D]. 李秀霞.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018

碩士論文
[1]利用轉(zhuǎn)基因RNAi技術(shù)沉默稻縱卷葉螟膜結(jié)合型海藻糖酶基因[D]. 王爽.貴州大學(xué) 2017
[2]斯氏艾美耳球蟲(chóng)TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[D]. 樊翀宇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]西花薊馬的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及花薊馬線粒體全基因組序列的測(cè)定與分析[D]. 湯云霞.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]家蠶常用內(nèi)參基因的穩(wěn)定性分析及兩種實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法比較[D]. 彭然.蘇州大學(xué) 2012
[5]家蠶和二化螟兩個(gè)乙酰膽堿酯酶的RNA干擾及功能分析[D]. 楊麗雯.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3002992