本研究選用3個(gè)強(qiáng)耐鹽的玉米自交系為試驗(yàn)材料,通過(guò)鹽脅迫試驗(yàn),從中篩選出耐鹽性最強(qiáng)的為玉米自交系M-2導(dǎo)入系,利用cDNA-AFLP技術(shù)分離不同鹽脅迫下M-2導(dǎo)入系的差異表達(dá)基因,旨在為進(jìn)一步研究玉米苗期的耐鹽機(jī)理提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1、5個(gè)鹽濃度脅迫下的M-2導(dǎo)入系、Hr30導(dǎo)入系和Mo17導(dǎo)入系的株高、生物量、葉綠素含量、凈光合速率以及可溶性蛋白質(zhì)的含量大體上隨著鹽濃度的增加而呈下降的趨勢(shì);根長(zhǎng)、相對(duì)電導(dǎo)率、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、過(guò)氧化物酶活性和根冠比大體上呈先上升后下降的趨勢(shì)。2、利用主成分分析歸納出株高、凈光合速率、丙二醛等9個(gè)與耐鹽密切相關(guān)的指標(biāo),運(yùn)用模糊數(shù)學(xué)隸屬函數(shù)分析得出,3個(gè)玉米自交系的耐鹽性強(qiáng)弱依次為M-2導(dǎo)入系>Hr30導(dǎo)入系>Mo17導(dǎo)入系。3、采用224對(duì)引物組合對(duì)4個(gè)不同濃度鹽脅迫下的M-2導(dǎo)入系進(jìn)行cDNA-AFLP分析。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了532條TDFs,并驗(yàn)證了其中289條的真實(shí)性。根據(jù)TDFs差異表達(dá)情況將其分成8個(gè)類型,誘導(dǎo)型、中濃度誘導(dǎo)型、特定濃度誘導(dǎo)型、上調(diào)型、下調(diào)型、鹽脅迫抑制型、中濃度抑制型和其他表達(dá)類型,并成功回收測(cè)... 

【文章來(lái)源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 導(dǎo)入系對(duì)鹽脅迫的生理響應(yīng)
        1.1.1 植物形態(tài)指標(biāo)對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)
        1.1.2 植物生理特性對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)
    1.2 植物的抗鹽的生理機(jī)制
        1.2.1 植物的耐滲透調(diào)節(jié)
        1.2.2 植物的耐離子調(diào)節(jié)
        1.2.3 抗氧化防御系統(tǒng)
        1.2.4 植物激素調(diào)節(jié)
    1.3 植物抗鹽的分子機(jī)制
        1.3.1 離子區(qū)域化
        1.3.2 滲透調(diào)節(jié)
        1.3.3 抗氧化防御機(jī)制
    1.4 CDNA-AFLP技術(shù)
        1.4.1 cDNA-AFLP技術(shù)原理
        1.4.2 cDNA-AFLP技術(shù)在差異表達(dá)研究中的應(yīng)用
    1.5 研究目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 導(dǎo)入系對(duì)鹽脅迫的生理響應(yīng)
    2.1 供試材料
    2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法
        2.3.1 形態(tài)指標(biāo)的測(cè)定
        2.3.2 生理指標(biāo)的測(cè)定
    2.4 數(shù)據(jù)分析
    2.5 結(jié)果與分析
        2.5.1 鹽脅迫對(duì)3個(gè)玉米自交系形態(tài)的影響
        2.5.2 鹽脅迫對(duì)3個(gè)玉米自交系葉片葉綠素含量和Pn的影響
        2.5.3 鹽脅迫對(duì)3個(gè)玉米自交系葉片電導(dǎo)率、MDA、可溶性蛋白及抗氧化酶活性的影響
        2.5.4 耐鹽指標(biāo)的相關(guān)性分析和方差分析
        2.5.5 3個(gè)玉米自交系耐鹽指標(biāo)間主成分分析
        2.5.6 隸屬函數(shù)分析
    2.6 討論
    2.7 小結(jié)
第三章 玉米苗期鹽脅迫CDNA-AFLP分析
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 鹽脅迫處理
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 總RNA的提取
        3.3.2 雙鏈cDNA的合成
            3.3.2.1 第一鏈cDNA的合成
            3.3.2.2 雙鏈cDNA的合成
        3.3.3 雙鏈cDNA酶切及接頭連接
            3.3.3.1 酶切
            3.3.3.2 接頭的連接
        3.3.4 預(yù)擴(kuò)增
        3.3.5 選擇性擴(kuò)增
        3.3.6 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
            3.3.6.1 電泳長(zhǎng)、短板的準(zhǔn)備及組裝
            3.3.6.2 聚丙烯酰胺凝膠的制備及灌膠
            3.3.6.3 擴(kuò)增產(chǎn)物聚丙烯酰胺凝膠電泳
            3.3.6.4 銀染染色過(guò)程
        3.3.7 耐鹽差異片段的回收與測(cè)序
            3.3.7.1 差異片段的回收
            3.3.7.2 再次PCR
            3.3.7.3 差異片段的瓊脂糖回收
            3.3.7.4 差異片段與T載體的連接
            3.3.7.5 差異片段連接產(chǎn)物的平板轉(zhuǎn)化
            3.3.7.6 菌液PCR陽(yáng)性檢測(cè)
            3.3.7.7 測(cè)序結(jié)果分析
        3.3.8 差異片段的Real-time qRT-PCR
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 RNA的提取
        3.4.2 cDNA合成
            3.4.2.1 cDNA單鏈檢測(cè)
            3.4.2.2 雙鏈cDNA檢測(cè)
        3.4.3 雙鏈cDNA雙酶切
        3.4.4 預(yù)擴(kuò)增檢測(cè)
        3.4.5 選擇性擴(kuò)增檢測(cè)
        3.4.6 不同濃度鹽脅迫下玉米的cDNA-AFLP差異表達(dá)分析
        3.4.7 鹽脅迫相關(guān)TDF的分類
        3.4.8 玉米耐鹽相關(guān)TDFs的回收測(cè)序
            3.4.8.1 差異片段的回收
            3.4.8.2 再次PCR
            3.4.8.3 DNA瓊脂糖檢測(cè)
            3.4.8.4 陽(yáng)性菌的檢測(cè)
        3.4.9 TDFs的功能注釋
        3.4.10 部分差異條帶qRT-PCR分析
    3.5 討論
        3.5.1 玉米鹽響應(yīng)相關(guān)基因的生物學(xué)意義
            3.5.1.1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
            3.5.1.2 脅迫響應(yīng)
            3.5.1.3 轉(zhuǎn)錄因子
    3.6 小結(jié)
第四章結(jié)論
    4.1 3個(gè)玉米自交系耐鹽性評(píng)價(jià)
    4.2 鹽脅迫相關(guān)基因的CDNA-AFLP分析
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]花生對(duì)鹽脅迫的適應(yīng)性及其耐鹽性評(píng)價(jià)[D]. 符方平.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]青花菜軟腐病病程的cDNA-AFLP差異表達(dá)分析[D]. 張鳳云.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[5]新耐鹽基因NHXFS1在煙草中的表達(dá)及其耐鹽性分析[D]. 黃繼斌.華東師范大學(xué) 2012
[6]玉米鹽脅迫差異基因的分離[D]. 嚴(yán)定平.海南大學(xué) 2009
[7]棉花鹽脅迫誘導(dǎo)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建與篩選及棉花金屬硫蛋白基因功能分析[D]. 薛彤彤.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：2999270