外源基因在轉(zhuǎn)基因植物穩(wěn)定表達(dá),是改變農(nóng)藝性狀和脅迫抗性的重要手段之一。但是在成功導(dǎo)入并且結(jié)構(gòu)完整的情況下,仍會(huì)出現(xiàn)基因不能表達(dá)或者表達(dá)效率低下的問(wèn)題,這種現(xiàn)象常常與基因沉默機(jī)制相關(guān)。其中RNA水平基因調(diào)控的基因沉默現(xiàn)象普遍存在,有研究表明韌皮部從源到各個(gè)庫(kù)運(yùn)輸同化物同時(shí)也運(yùn)輸一些如m RNA與小RNA等生物大分子,且m RNA介導(dǎo)的基因沉默可以在細(xì)胞與細(xì)胞間傳遞,也可以進(jìn)行從根到芽的長(zhǎng)距離傳遞。目前對(duì)于基因沉默的長(zhǎng)距離運(yùn)輸機(jī)制仍不甚明了,本試驗(yàn)立足基因沉默的長(zhǎng)距離運(yùn)輸可以穩(wěn)定遺傳的擬南芥突變體,篩選與沉默速率相關(guān)基因并進(jìn)行功能驗(yàn)證。本研究的主要結(jié)果如下:1)本實(shí)驗(yàn)利用基于EMS處理轉(zhuǎn)基因Rt SS材料得到的沉默速率不同的可穩(wěn)定遺傳突變體材料imos1和GS6雜交構(gòu)建F3代基因混合池,通過(guò)全基因組測(cè)序與WT比對(duì)分析差異SNP,得到9個(gè)候選基因:AT1G32230,AT1G47560,AT1G62580,AT3G09405,AT4G28050,AT4G30170,AT5G45960,AT5G56470,AT5G59740。2)基于前人研究基礎(chǔ),構(gòu)建CRISPR/Cas系統(tǒng)p Cas Kan... 

【文章來(lái)源】：長(zhǎng)江大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥中研究細(xì)胞間和長(zhǎng)距離RNA運(yùn)動(dòng)的轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)(Brosnan,etal.2011)

DNA 雙螺旋模型的提出，到 70 年代基因工程的出現(xiàn)，人類(lèi)從孟德?tīng)栠z傳規(guī)律認(rèn)識(shí)遺傳現(xiàn)象逐漸過(guò)渡到通過(guò)基因改造干預(yù)遺傳過(guò)程并發(fā)展出一系列技術(shù)如導(dǎo)入外源基因、基因沉默、基因編輯等。近十年來(lái)，利用基因工程改造的人工核酸酶實(shí)現(xiàn)了更高效和較精確的基因編輯。早期的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)，僅在小鼠[25]和果蠅[26]等少數(shù)模式生物中實(shí)現(xiàn)了同源重組介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯。隨著蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究的新突破和人工核酸內(nèi)切酶新發(fā)展，我們根據(jù)基因編輯技術(shù)可技術(shù)產(chǎn)生的時(shí)間分成三代編輯技術(shù)，鋅指核酸內(nèi)切酶[27]（ZFN）、類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶[28]（TALEN）和 CRISPR/Cas9[29]。1996 年 Kim 和 Cha 等[30]將鋅指結(jié)構(gòu)與限制性?xún)?nèi)切酶 FokI 酶酶解中心串聯(lián)結(jié)合，得到了鋅指嵌合核酸酶，即傳統(tǒng)意義上的鋅指核酸酶。FokI 來(lái)自于海床黃桿菌，它是一種只在二聚體狀態(tài)時(shí)才有酶切活性的限制性?xún)?nèi)切酶。每個(gè) ZFN 都是由1 個(gè) FokI 單體和 1 個(gè) DNA 結(jié)合域相連構(gòu)成的，當(dāng)一對(duì) ZFN 分別識(shí)別所對(duì)應(yīng)的靶序列（通常 5-7 個(gè)堿基），并與之結(jié)合，激活 FokI 核酸內(nèi)切酶，發(fā)揮剪切作用，導(dǎo)致核酸雙鏈斷裂（double strand breaks，DSB），然后細(xì)胞啟動(dòng)相關(guān) DNA 修復(fù)機(jī)制，鋅指對(duì) DNA 的識(shí)別剪切機(jī)制見(jiàn)圖 1-1。

圖 2-1 親本照片F(xiàn)ig.2-1 Photos of parentsF3代篩選選出苗后 10 天出現(xiàn)熒光沉默的植株，我現(xiàn)熒光沉默的植株，由圖可看出圖 2-2A 中選擇一個(gè)株系進(jìn)行 F3代觀察鑒定沉默圖 2-1 F

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]擬南芥ABA受體與UGT71B6的相互作用研究[J]. 樊晶,馬燕林,曹婧,陳喬喬,楊毅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(02)
[2]利用CRISPR/Cas9技術(shù)創(chuàng)制水稻落粒性基因qSH1突變體及突變特征分析[J]. 盛夏冰,汪雪峰,譚炎寧,孫志忠,余東,袁貴龍,袁定陽(yáng),段美娟.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(02)
[3]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子基因WRKY72的特性分析及其抗逆功能鑒定[J]. 李琪,李燁,牛芳芳,郭小華,趙新杰,吳相民,楊博,江元清.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(02)
[4]利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選水稻類(lèi)受體蛋白激酶FTPK1的互作蛋白[J]. 李穎秀,潘教文,李臻,王慶國(guó),劉煒.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[5]煙草NtGCN2的原核表達(dá)、純化及多克隆抗體制備[J]. 郝英辰,龍?jiān)?郭豪,李寧,張松杰,趙棋,張松濤.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(01)
[6]柑橘黃龍病病原CLIBASIA＿03230基因的克隆及其編碼蛋白的原核表達(dá)[J]. 趙國(guó)歡,張小兵,李凡,李為民.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2019(01)
[7]擬南芥AFP4的克隆、原核表達(dá)和純化及其與ABI5的互作[J]. 鄧子兵,邱梁堃,馬建忠.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(12)
[8]小麥錳超氧化物歧化酶基因的克隆與原核表達(dá)[J]. 于永昂,張蕾,趙俊杰,賀杰,馬振鋒,胡海燕.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(23)
[9]利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯水稻ROP基因OsRac5[J]. 王美娜,彭靜靜,王凱婕,安文靜,劉亞菲,李珂嘉,梁衛(wèi)紅.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2018(12)
[10]大豆GmLEA的分離及其在種子活力中的功能分析[J]. 周亞麗,朱雅婧,趙飛云,王爽,劉骕骦,郭凌凱,趙海紅,麻浩.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(23)

博士論文
[1]擬南芥Exocyst復(fù)合體亞基SEC3A在花粉萌發(fā)中的功能研究[D]. 李巖.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號(hào)：2995855