目的:研究NUF-2基因表達下調對肝細胞癌的增殖及細胞周期的影響。材料與方法:1.選定HepG2、BEL-7404、SMMC-7721、BEL-7402四種肝癌細胞株與正常肝細胞株HL-7702為研究目標,利用熒光實時定量PCR（qRT-PCR）檢驗NUF-2在上述細胞中的表達情況;2.挑選NUF-2高表達的肝癌細胞株,通過RNA干擾技術構建抑制NUF-2基因表達的慢病毒載體;3.用慢病毒感染選定的肝癌細胞株,獲取NUF-2被穩(wěn)定抑制表達的肝癌細胞株;4.通過qRT-PCR檢測肝癌細胞中NUF-2 mRNA表達情況;5.通過Western blotting檢驗肝癌細胞抑制NUF-2表達后蛋白表達效果;6.通過Celigo細胞熒光計數(shù)法及MTT實驗檢測抑制NUF-2表達后肝癌細胞增殖能力的影響;7.通過流式細胞儀檢測抑制NUF-2表達后肝癌細胞細胞周期的改變情況。結果:1.在4種人肝癌細胞系（SMMC-7721、HepG2、BEL-7404、BEL-7402）中NUF-2基因的表達:熒光實時定量PCR（qRT-PCR）實驗結果顯示,4種肝癌細胞系（HepG2、BEL-7404、SMMC-... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

1-2pHelper1.0載體圖譜圖3.5.1-3pHelper2.0載體圖譜

載體的構建、包裝和穩(wěn)定細胞株的篩選載體的構建驗使用的是 GV115 載體，載體圖譜如圖 3.5.1-1。雙酶切。使用的輔助質粒載體 pHelper1.0、pHelpe-2、3.5.1-3 所示：

第 4 章 實驗結果4.1 在 4 種人肝癌細胞系中 NUF-2 基因的表達情況熒光實時定量 PCR（qRT-PCR）實驗結果顯示，4 種人肝癌細胞系NUF-2 mRNA 水平較正常人肝癌細胞 HL-7702 顯著增高，其中以 SMM細胞的 mRNA 表達量最高，所以本實驗選用 SMMC-7721 細胞作為抑制胞，見圖 4.1-1。

【參考文獻】：
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本文編號：2993619