目的:研究NUF-2基因表達(dá)下調(diào)對(duì)肝細(xì)胞癌的增殖及細(xì)胞周期的影響。材料與方法:1.選定HepG2、BEL-7404、SMMC-7721、BEL-7402四種肝癌細(xì)胞株與正常肝細(xì)胞株HL-7702為研究目標(biāo),利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）檢驗(yàn)NUF-2在上述細(xì)胞中的表達(dá)情況;2.挑選NUF-2高表達(dá)的肝癌細(xì)胞株,通過RNA干擾技術(shù)構(gòu)建抑制NUF-2基因表達(dá)的慢病毒載體;3.用慢病毒感染選定的肝癌細(xì)胞株,獲取NUF-2被穩(wěn)定抑制表達(dá)的肝癌細(xì)胞株;4.通過qRT-PCR檢測(cè)肝癌細(xì)胞中NUF-2 mRNA表達(dá)情況;5.通過Western blotting檢驗(yàn)肝癌細(xì)胞抑制NUF-2表達(dá)后蛋白表達(dá)效果;6.通過Celigo細(xì)胞熒光計(jì)數(shù)法及MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制NUF-2表達(dá)后肝癌細(xì)胞增殖能力的影響;7.通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)抑制NUF-2表達(dá)后肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期的改變情況。結(jié)果:1.在4種人肝癌細(xì)胞系（SMMC-7721、HepG2、BEL-7404、BEL-7402）中NUF-2基因的表達(dá):熒光實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4種肝癌細(xì)胞系（HepG2、BEL-7404、SMMC-... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

1-2pHelper1.0載體圖譜圖3.5.1-3pHelper2.0載體圖譜

載體的構(gòu)建、包裝和穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選載體的構(gòu)建驗(yàn)使用的是 GV115 載體，載體圖譜如圖 3.5.1-1。雙酶切。使用的輔助質(zhì)粒載體 pHelper1.0、pHelpe-2、3.5.1-3 所示：

第 4 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 在 4 種人肝癌細(xì)胞系中 NUF-2 基因的表達(dá)情況熒光實(shí)時(shí)定量 PCR（qRT-PCR）實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，4 種人肝癌細(xì)胞系NUF-2 mRNA 水平較正常人肝癌細(xì)胞 HL-7702 顯著增高，其中以 SMM細(xì)胞的 mRNA 表達(dá)量最高，所以本實(shí)驗(yàn)選用 SMMC-7721 細(xì)胞作為抑制胞，見圖 4.1-1。

【參考文獻(xiàn)】：
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