以紫花苜蓿的子葉或葉片為外植體,建立高頻體胚發(fā)生及成苗技術(shù)體系,為苜蓿耐逆性狀的遺傳改良提供技術(shù)支撐。在愈傷誘導(dǎo)、體胚誘導(dǎo)、體胚成熟與萌發(fā)等幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié),分析比較培養(yǎng)基組分對(duì)培養(yǎng)效果的影響。建立在SHDK培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷、MB（-/+）+ABA 0.4mg/L+PEG-6000 50g/L+蔗糖50g/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)體胚、Bio2Y培養(yǎng)基上促體胚發(fā)育成熟、1/2 MS（或SH）培養(yǎng)基上體胚萌發(fā)成苗的高頻再生技術(shù)體系。最適條件下,每克胚性愈傷組織可產(chǎn)生77.9個(gè)正常萌發(fā)成苗的健康體胚。再生植株在生長(zhǎng)箱內(nèi)經(jīng)過(guò)2周20℃、16h/d的光照培養(yǎng)后移栽溫室,成活率達(dá)90%以上。利用該離體再生技術(shù)成功地將凝集素基因PPA導(dǎo)入苜蓿中,獲得抗蚜轉(zhuǎn)基因苜蓿。 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017,26(06)北大核心

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圖１不同培養(yǎng)基上的體胚誘導(dǎo)效果ａ．ＭＳＢＮ培養(yǎng)基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培養(yǎng)基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培養(yǎng)基ＭＢ（－）

體胚數(shù)也少。ＭＢ（－／＋）培養(yǎng)基［在ＭＢ（－）基礎(chǔ)上ＫＮＯ３加倍］的體胚誘導(dǎo)效果較好，每一塊愈傷組織都有體胚形成，且愈傷組織內(nèi)部到后期亦有體胚形成；體胚數(shù)量也較其他３個(gè)處理明顯增加（圖１－ｄ），每克愈傷組織形成的體胚數(shù)平均為３９．５±６．２。ａ．ＭＳＢＮ培養(yǎng)基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培養(yǎng)基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培養(yǎng)基ＭＢ（－）ｍｅｄｉｕｍ；ｄ．ＭＢ（－／＋）培養(yǎng)基ＭＢ（－／＋）ｍｅｄｉｕｍ圖１不同培養(yǎng)基上的體胚誘導(dǎo)效果Ｆｉｇ．１Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａ２．３體胚成熟與萌發(fā)將子葉型胚直接轉(zhuǎn)移到ＭＳ０或１／２ＭＳ培養(yǎng)基上后，大部分體胚不能正常萌發(fā)成苗。部分胚狀體子葉異常膨大后停止生長(zhǎng)，或出現(xiàn)連體的子葉，或出現(xiàn)試管苗的玻璃化，或出現(xiàn)大量次級(jí)體胚，不能發(fā)育成完整的植株；有的胚狀體膨大后出現(xiàn)脫分化重新愈傷化現(xiàn)象。據(jù)２個(gè)批次試驗(yàn)的調(diào)查統(tǒng)計(jì)，體胚正常萌發(fā)成苗的比率僅為５．８％（表２）。針對(duì)苜蓿體胚在ＭＳ０或１／２ＭＳ培養(yǎng)基上發(fā)生的玻璃化現(xiàn)象，采取將三角瓶放入光照培養(yǎng)箱以增加光強(qiáng)，提高瓊脂質(zhì)量濃度以提高培養(yǎng)基滲透壓、降低容器濕度，使用透氣透光好的封口膜降低ＮＨ＋４濃度，添加活性碳等措施，但效果均不明顯。為此，借鑒黎茵等［２２］的方法，添加一個(gè)體胚成熟的液體培養(yǎng)過(guò)程，即將獲得的體胚放入促進(jìn)體胚成熟的液體培養(yǎng)基（ＳＨ基本鹽＋Ｌ－Ｐｒｏｌｉｎｅ３．４５ｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１．６５ｇ／Ｌ＋蔗糖２０

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]紫花苜蓿兩種再生體系的優(yōu)化及比較[J]. 王成龍,周美亮,董雪妮,唐益雄,邵繼榮,吳燕民.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2015(04)
[2]轉(zhuǎn)GsGST13/SCMRP基因雙價(jià)苜蓿的耐鹽性分析[J]. 吳婧,才華,柏錫,紀(jì)巍,魏正巍,唐立酈,趙陽(yáng),朱延明.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2014(01)
[3]6個(gè)紫花苜蓿栽培品種高效再生體系的建立[J]. 張麗,甘曉燕,王敬東,陳虞超,石磊,宋玉霞.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(08)
[4]轉(zhuǎn)GsPPCK1基因苜蓿植株的獲得及其耐堿性分析[J]. 魏正巍,朱延明,化燁,才華,紀(jì)巍,柏錫,王臻昱,文益東.  作物學(xué)報(bào). 2013(01)
[5]基于漩渦振蕩莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)轉(zhuǎn)化法的Lyz-GFP雙元基因在‘隴東苜蓿’中的轉(zhuǎn)化和表達(dá)[J]. 王庭輝,馬暉玲,史毅,安惠惠.  甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(05)
[6]聚乙二醇6000對(duì)雜花苜蓿體胚發(fā)生的影響及體胚的細(xì)胞學(xué)觀察[J]. 楊國(guó)鋒,毛雅妮,孫娟,張德罡,盛亦兵.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2010(18)
[7]Development of Alfalfa （Medicago sativa L.） Regeneration System and Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation[J]. ZHANG He, HUANG Qi-man and SU Jin Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, P.R.China.  Agricultural Sciences in China. 2010(02)
[8]甘露醇、蔗糖和低溫預(yù)處理對(duì)花楸體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的影響[J]. 沈海龍,高翔翔,楊玲.  植物生理學(xué)通訊. 2008(04)
[9]不同基因型玉米幼胚愈傷組織的培養(yǎng)特性[J]. 郭新梅,張曉東,韓立新,陳耀鋒.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(04)
[10]DREB2A基因?qū)俎＿z傳轉(zhuǎn)化的研究[J]. 盛慧,朱延明,李杰,柏錫,才華.  草業(yè)科學(xué). 2007(03)



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