目的從五味子中克隆木脂素生物合成途徑松脂醇-落葉松脂素還原酶（Pinoresinol-lariciresinol reductases,PLR）基因及其啟動子序列,并進(jìn)行生物信息學(xué)與表達(dá)分析。方法根據(jù)轉(zhuǎn)錄組PLR測序序列設(shè)計特異性引物,克隆ScPLR并進(jìn)行生物信息學(xué)分析;采用TAIL-PCR對Sc PLR啟動子序列擴(kuò)增,并進(jìn)行序列分析;采用實(shí)時熒光定量PCR（q RT-PCR）分析果實(shí)不同發(fā)育時期ScPLR的表達(dá)。結(jié)果 Sc PLR基因開放閱讀框（ORF）全長837bp,編碼278個氨基酸;ScPLR蛋白相對分子質(zhì)量31419.85,理論等電點(diǎn)8.97;具有跨膜結(jié)構(gòu),無信號肽,為穩(wěn)定性疏水蛋白,主要由α-螺旋和無規(guī)卷曲構(gòu)成;亞細(xì)胞定位預(yù)測Sc PLR主要定位于細(xì)胞質(zhì);系統(tǒng)進(jìn)化顯示Sc PLR與蓖麻PLR親緣關(guān)系較近。克隆到Sc PLR基因啟動子長994bp,具有TATA-box、CAAT-box基本元件、光調(diào)控、生長素響應(yīng)、厭氧誘導(dǎo)、防御和應(yīng)激反應(yīng)的多種調(diào)控元件;qRT-PCR結(jié)果顯示ScPLR表達(dá)量呈現(xiàn)果實(shí)膨大期快速增加而進(jìn)入著色期迅速降低的變化趨勢。結(jié)論獲得了Sc PLR基因及其啟... 

【文章來源】：中草藥. 2020,51(18)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

五味子ScPLR核苷酸序列及其氨基酸序列

圖1 五味子ScPLR核苷酸序列及其氨基酸序列利用SOMPA預(yù)測ScPLR蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)（圖3），其中α-螺旋所占比例最大，為38.85%，無規(guī)則卷曲為34.89%，延伸鏈為18.35%，β-轉(zhuǎn)角為7.91%，由此可見，ScPLR為混合型蛋白，α-螺旋和無規(guī)卷曲是其主要的結(jié)構(gòu)元件。運(yùn)用Phyre2數(shù)據(jù)庫預(yù)測分析ScPLR蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)，運(yùn)用Rasmol軟件分析Sc PLR基因編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物三級結(jié)構(gòu)，跨膜螺旋預(yù)測顯示蛋白有跨膜結(jié)構(gòu)，這與跨膜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果相一致，序列相似度為56%，三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果與二級結(jié)構(gòu)相符（圖4）。

利用SOMPA預(yù)測ScPLR蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)（圖3），其中α-螺旋所占比例最大，為38.85%，無規(guī)則卷曲為34.89%，延伸鏈為18.35%，β-轉(zhuǎn)角為7.91%，由此可見，ScPLR為混合型蛋白，α-螺旋和無規(guī)卷曲是其主要的結(jié)構(gòu)元件。運(yùn)用Phyre2數(shù)據(jù)庫預(yù)測分析ScPLR蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)，運(yùn)用Rasmol軟件分析Sc PLR基因編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物三級結(jié)構(gòu)，跨膜螺旋預(yù)測顯示蛋白有跨膜結(jié)構(gòu)，這與跨膜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果相一致，序列相似度為56%，三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果與二級結(jié)構(gòu)相符（圖4）。圖4 五味子ScPLR基因編碼蛋白質(zhì)產(chǎn)物的三級結(jié)構(gòu)


本文編號：2992089