肉制品的安全和質(zhì)量持續(xù)受到全社會(huì)關(guān)注。常用基于核酸的分析方法進(jìn)行肉品鑒別等檢驗(yàn)檢疫工作。其中,DNA條形碼技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)分類(lèi)方法的有力補(bǔ)充;在動(dòng)物物種分類(lèi)和鑒別工作中,線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞基I（COI）核酸序列是通用的條形碼基因。純粹的條形碼技術(shù)通過(guò)同高靈敏、低成本、便攜式的生物傳感器相結(jié)合,可以有效解決條形碼技術(shù)商業(yè)化發(fā)展和食品安全快速檢測(cè)的問(wèn)題。因此,本課題嘗試搭建以動(dòng)物線粒體COI基因?yàn)樽R(shí)別元件,以一次性絲網(wǎng)印刷生物傳感器為器件的傳感平臺(tái),通過(guò)對(duì)生豬肉、生牛肉、生羊肉和生雞肉、生豬肉/牛肉混合二元物和市售樣品探究,評(píng)價(jià)該傳感平臺(tái)的特異性、靈敏性和商業(yè)適用性等。主要工作開(kāi)展如下:1.構(gòu)建線粒體COI基因電化學(xué)生物傳感平臺(tái)的最優(yōu)條件為.:探針與靶標(biāo)序列最佳結(jié)合時(shí)間為45分鐘,最佳雜交溫度為45分鐘;亞甲基藍(lán)最佳工作濃度為1.5×10-5 M,最佳孵育時(shí)間為15分鐘;生牛肉和生豬肉靶標(biāo)序列在10-13-10-5 mol/L 范圍內(nèi)與還原峰電流線性關(guān)系良好,檢測(cè)限分別為5.048×10-14M和3.491×10-14M。初步驗(yàn)證了構(gòu)建的該電化學(xué)生物傳感器有可行性。2.設(shè)計(jì)模擬生豬肉/牛... 

【文章來(lái)源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２實(shí)時(shí)ＰＣＲ技術(shù)定量原理??Ｆｉｇ．１－２?Ｔｈｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｆｏｒ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??

ｎ等［６７］??通過(guò)對(duì)液滴數(shù)字ＰＣＲ?（ｄｄＰＣＲ）分析技術(shù)的探究，對(duì)羊肉中有雞肉摻入的情況進(jìn)行??了定量檢測(cè)；同時(shí)，通過(guò)引入常數(shù)因子來(lái)轉(zhuǎn)換在不同摻假比例下，拷貝數(shù)與混合肉類(lèi)??比率的關(guān)系。與實(shí)時(shí)定量ＰＣＲ相比，在５－８０％的范圍內(nèi)ｄｄＰＣＲ分析技術(shù)的偏差小??于９％，證明ｄｄＰＣＲ技術(shù)在絕對(duì)定量分析中更準(zhǔn)確。??Ａ?Ａ?廠￣￣??ｆ?廠ｖ?變?nèi)??①山?－ｆ?遇??麟?Ｄｒｏ辦?Ｒｅ？Ｊ？ｒ???ＤｆｏｐｋＫ?Ｇ？ｎ？ｆ＾ｙ???？「＿■??ｊ??圖１－３Ｂ１０ＲＡＤＱＸ２００微滴式數(shù)字ＰＣＲ操作流程（Ａ）和８孔微滴生成板的安裝（Ｂ）?ｌ６８］??Ｆｉｇ．１－３?Ｔｈｅ?ｏｐｅｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＢＩＯＲＡＤ?ＱＸ２００?ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ－ｄｉｇｉｔａｌ?ＰＣＲ?（Ａ）?ａｎｄ?ｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?８－ｈｏｌｅ??ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｏａｒｄ?（Ｂ）?１狀！未奴書(shū)簽？］??雖然ｄＰＣＲ技術(shù)是非常有運(yùn)用價(jià)值的ＤＮＡ定量檢測(cè)技術(shù)，可以在微小反應(yīng)體??系中達(dá)到高度檢測(cè)精確度和靈敏性，以及實(shí)現(xiàn)高通檢測(cè)，但是，正是由于整個(gè)檢測(cè)過(guò)??程處于微體系中，對(duì)液滴的操控水平要求極高，如何實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定且高效的結(jié)果，是第三??代ＰＣＲ技術(shù)從實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)研宄走向市場(chǎng)化亟需解決的問(wèn)題。??１．２．３．４?ＤＮＡ條形碼技術(shù)??加拿大動(dòng)物學(xué)家Ｐａｕｌ?Ｈｅｂｅｒｔ等［６９］通過(guò)分析動(dòng)物界超過(guò)１萬(wàn)種物種的線粒體細(xì)胞??色素Ｃ氧化酶亞基Ｉ?（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｃｏｘｄａｓｅｌ，ＣＯＩ）基因序列，發(fā)現(xiàn)９８％的物種種內(nèi)??遺傳距離差距小于２％，而種間差距卻高達(dá)１１．３％；?Ｈｅｂｅ

?北京化工大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???［７９】通過(guò)使用條形碼對(duì)美國(guó)超市里出售的５４種肉類(lèi)進(jìn)行錯(cuò)誤標(biāo)簽的成功識(shí)別。??。，為一酵■?Ｈ??ＯｙｔｏｄｗｓＴＷ?ｃ?＜ｋ？ｒｍｎ?〇ｙ？�。澹瑁睿幔恚�?ｃＡ？＾ｓｗ？〇ｗ？?Ｏｎｎ？ｍ?ｔｍｍｔｔｉｂｉ?Ｏ＾ｘｍｋｍｉ?＾ｔａｍｍ??圖１－５線粒體ＤＮＡ編碼亞基（Ａ）和線粒體基因組圖（Ｂ）??Ｆｉｇ．１－５?Ｔｈｅ?ｃｏｄｉｎｇ?ｓｕｂｕｎｉｔ?ｏｆ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ＤＮＡ?（Ａ）?ａｎｄ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ｇｅｎｏｍｅ?ｍａｐ?（Ｂ）??近年來(lái)，開(kāi)發(fā)新型ＤＮＡ條碼也有顯著進(jìn)展，逐漸發(fā)展出了第二代Ｃ＾Ａ條形碼，??即復(fù)合ＤＮＡ條形碼（ＤＮＡ?ｍｅｔａｂａｒｃｏｄｉｎｇ）以及微小ＤＮＡ條形碼（ＤＮＡ??ｍｉｎｉｂａｒｃｏｄｉｎｇ）技術(shù)［８＿１］。ＭａｒｔｉｊｎＳｔａａｔｓ．等［８２】認(rèn)為復(fù)合ＤＮＡ條形碼技術(shù)是可以同??時(shí)用于檢測(cè)復(fù)雜樣品中的多種物種的技術(shù)，也可用于含有高度降解ＤＮＡ的深加工產(chǎn)??品的鑒別，現(xiàn)在主要被開(kāi)發(fā)利用在鑒定傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的瀕危和危險(xiǎn)物種［８３］；又如??Ｈａｊｉｂａｂａｅｉ等［８４］提出對(duì)于博物館中易發(fā)生的歷史標(biāo)本等物質(zhì)降解問(wèn)題，可以運(yùn)用??ｍｉｎｉ－ＤＮＡ條形碼技術(shù)來(lái)解決，并且通過(guò)采用１００－２００?ｂｐ的短小條形碼核酸片段，完??成了館藏關(guān)于哥斯達(dá)黎加地區(qū)寄生蜂標(biāo)本的鑒定工作。雖然，ＤＮＡ條形碼技術(shù)的分??類(lèi)結(jié)果真實(shí)可靠，是對(duì)數(shù)量龐大、分類(lèi)特征性不強(qiáng)的傳統(tǒng)物種鑒定技術(shù)的有力補(bǔ)充，??但是基于純粹的ＤＮＡ分析方法存在流程繁瑣、人力資源成本較高等不足，因此，要??實(shí)現(xiàn)ＤＮＡ條形碼技術(shù)更加自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化的流程檢測(cè)，就需要聯(lián)用更加簡(jiǎn)便、低成


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