世界上有大半以上的人口將稻米作為主食,水稻作為全球最主要的糧食和經(jīng)濟(jì)作物之一,病蟲害的防治一直以來都是一件至關(guān)重要的事情。稻縱卷葉螟（Cnaphalocrocis medinalis）主要以包括水稻在內(nèi)的眾多禾本科植物葉片為食,因此也是對此類農(nóng)作物危險(xiǎn)相當(dāng)嚴(yán)重的害蟲之一。幾丁質(zhì)合成酶（chitin synthase）是昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)合成通路上至關(guān)重要的一個(gè)酶,在昆蟲生長發(fā)育周期中扮演著十分重要的角色,因此這個(gè)酶也常被科研工作者作為研究對象。本論文的主要目的是通過RT-PCR結(jié)合RACE技術(shù)克隆并分析稻縱卷葉螟幾丁質(zhì)合成酶B基因（CmCHSB）的全長cDNA序列。再利用植物轉(zhuǎn)基因RNAi技術(shù),獲得對CmCHSB具有明顯抗蟲效果的轉(zhuǎn)基因水稻植株。通過稻縱卷葉螟取食這種轉(zhuǎn)基因植株后的發(fā)育障礙和致死效應(yīng),從而達(dá)到利用安全有效的生物防治方法來防治稻縱卷葉螟。本研究的主要研究結(jié)果如下:1.稻縱卷葉螟幾丁質(zhì)合成酶B基因的克隆及表達(dá)譜本研究起初運(yùn)用RT-PCR方法擴(kuò)增出稻縱卷葉螟開放閱讀框部分片段,然后再利用RACE-PCR技術(shù)擴(kuò)增出CmCHSB的全長cDNA。然后將這兩部分所獲得的序列片段拼接得到稻... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

稻縱卷葉螟總RNA瓊脂糖凝膠電泳Fig.2.1AgarosegelelectrophoresisoftotalRNAfromC.medinalis

圖 2.2 稻縱卷葉螟 CmCHSB cDNA 的擴(kuò)增Fig. 2.2 The amplification products of CmCHSB from Cnaphalocrocis medinalisA：CmCHSB 的中間片段產(chǎn)物；B：CmCHSB 的 5'RACE 擴(kuò)增產(chǎn)物；C：CmCHSB 的 3'RACE 擴(kuò)增產(chǎn)物；M1：DL 2000 DNA marker；M2：DL 10000 DNA markerA: The intermediate product of CmCHSB; B: 5'RACE product of CmCHSB; C: 3'RACE product of CmCHSB;M1：DL 2000 DNA marker；M2：DL 10000 DNA marker通過藍(lán)白斑平板的篩選，把克隆成功的陽性菌落（圖 2.3）準(zhǔn)確地挑出來。

圖 2.5 部分鱗翅目昆蟲幾丁質(zhì)合成酶不氨基酸序列比對Fig. 2.5 Alignment of amino acids residues of chitin synthase B in different Lepidoptera insects用于比對的幾丁質(zhì)合成酶 B 來源物種及 GenBank 登錄號請參見表 2.19The source species and accession numbers for protein sequences used in alignment analysis are presented in Table2.19

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用RNA干擾技術(shù)沉默稻縱卷葉螟幾丁質(zhì)合成酶A基因[J]. 李嬌,杜娟,李尚偉.  山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào). 2016(03)
[2]稻縱卷葉螟海藻糖酶基因的克隆、分子特性和表達(dá)分析[J]. 田宇,杜娟,李尚偉,李嬌,王爽.  昆蟲學(xué)報(bào). 2016(06)
[3]轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品的應(yīng)用價(jià)值和安全風(fēng)險(xiǎn)展望[J]. 梁靚,李毅然.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào). 2015(11)
[4]稻縱卷葉螟幾丁質(zhì)合成酶及合成通路相關(guān)酶基因的鑒定及表達(dá)分析[J]. 余海中,黃克慧,汪婉玲,劉明輝,楊鑫,張彥,徐家萍.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2015(05)
[5]亞洲玉米螟幾丁質(zhì)合成酶B（CHSB）啟動(dòng)子序列克隆與分析[J]. 楊晨,魯新,王振營,席景會(huì),潘怡歐,畢銳,彭天飛,尚慶利.  環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào). 2015(04)
[6]重組RNA干擾表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 田宇,杜娟,李尚偉.  山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào). 2015(03)
[7]顯微注射構(gòu)建煙粉虱的RNAi技術(shù)體系[J]. 李如美,王少麗,張友軍.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2015(02)
[8]中華稻蝗幾丁質(zhì)脫乙�；�1基因的分子特性及功能[J]. 丁國偉,于榮榮,楊美玲,馬恩波,楊靜,張建珍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2014(11)
[9]常見的植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)及方法研究進(jìn)展[J]. 徐麗萍,劉樹英,于淼,劉洪章.  北方園藝. 2014(20)
[10]植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 駱翔,劉志頤,章樹民,申碩,王德福,王勁松.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2014(15)

博士論文
[1]利用RNAi技術(shù)沉默褐飛虱中腸基因的研究[D]. 閘雯俊.武漢大學(xué) 2012

碩士論文
[1]東亞飛蝗幾丁質(zhì)合成酶基因的分子特性及功能研究[D]. 劉曉健.山西大學(xué) 2010
[2]家蠶幾丁質(zhì)酶與幾丁質(zhì)合成酶的基因表達(dá)與功能研究[D]. 孔令斐.蘇州大學(xué) 2010
[3]IPT基因遺傳轉(zhuǎn)化谷稈兩用稻的研究[D]. 許明.福建農(nóng)林大學(xué) 2003



本文編號：2990871