ALK和Wx是影響稻米蒸煮食味品質(zhì)的兩大關鍵基因,分別控制稻米的糊化溫度（Gelatinization Temperature,GT）和直鏈淀粉含量（Amylose Content,AC）。這兩個基因在自然界中存在的多個等位變異是導致稻米品質(zhì)差異的主要原因。研究這兩個基因的等位基因的不同組合之品質(zhì)效應能夠進一步加深對稻米品質(zhì)形成的理解,并為優(yōu)質(zhì)稻米育種實踐提供指導意義。本研究首先通過對399份水稻種質(zhì)的ALK基因進行測序進一步明確了ALK基因的序列差異,利用基因組關聯(lián)分析的方法明確了ALK基因的功能位點,此外,還利用238份國際稻水稻群體及分子標記鑒定,明確了ALK等位基因在不同水稻亞種中的分布情況,其次通過構建近等基因系驗證ALK主要等位基因的功能差異及其對稻米品質(zhì)（糊化溫度）的效應。同時將ALK和Wx基因的主要等位變異進行聚合,利用近等基因系進一步驗證ALK和Wx基因主要等位變異的不同組合對稻米品質(zhì)的影響;此外,還利用灌漿期高溫處理實驗探究了不同ALK和Wx基因等位變異組合株系的品質(zhì)形成對高溫響應的異同。這些研究可以為全球變暖大環(huán)境下的優(yōu)質(zhì)水稻分子設計育種提供重要的決策依據(jù)。主要研... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２〖辦基因結構及等位基因變異類型??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ａｌｌｅｌｉｃ?ｖａｒｉａｎｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｗｘ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ｒｉｃ?

?第２章ＡＬＫ基因等位變異的遺傳解析及其效應分析???ＩＬＫ基因測序選取從起始密碼子（ＡＴＧ）到終止密碼子（ＴＧＡ）共４４２２?ｂｐ的序列。??利用引物設計軟件ｐｒｉｍｅｒ?５．０設計４對引物將目的基因分為４段進行擴增，其長度分別為??１．５ｋｂ．?１．２ｋｂ．?１．５ｋｂ?和?１．６ｋｂ，引物分別為：ＡＬＫ－ａｌ，ＡＬＫ－ａ２，ＡＬＫ－ｂｌ，ＡＬＫ－ｂ２，ＡＬＫ－ｃｌ，??ＡＬＫ－ｃ２，ＡＬＫ－ｄｌ，ＡＬＫ－ｄ２，引物序列列于表２．１。如圖２．２，通過４個測序片段的序列重疊??拼接，獲得也火基因全序列，共４．５?ｋｂ?（包括８個外顯子和７個內(nèi)含子）。??用于鑒定兒ＬＳ：等位基因ＦＮＰｓ差異的特異性４引物為：４２１１?（Ａ／Ｇ）和４３４２?（ＧＣ／ＴＴ），??引物序列列于表２．１。??ｊ——？?ＡＬＫ－ｂ?？?ｊ?ｊ——？?ＡＬＫ－ｄ?？???５＇ＵＴＲ?Ｅｘｏｎｌ?Ｅｘｏｎ２?Ｅｘｏｎ３?Ｅｘｏｎ４?Ｅｘ５?Ｅｘｏｎ６?Ｅｘｏｎ７?Ｅｘｏｎ８?３＇ＵＴＲ???Ｈｉｗｔ—＾??＇——？?ＡＬＫ－ａ?？——＇?＇?？?ＡＬＫ－ｃ?？?＇??圖２．２?乂ＬＳ：基因分段測序示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＡＬＫ?ｇｅｎｅ．??２．２．４稻米糊化特性的測定??１．熱力學特性分析??米粉熱力學特性利用差示掃描量熱儀ＤＳＣ?２００?Ｆ３?（ＮＥＴＺＳＣＨ，Ｇｅｒｍａｎｙ）進行測量，并??用其配套的分析軟件進行分析。具體步驟如下：稱取５?ｍｇ左右米粉于鋁制樣品盤中，記錄??質(zhì)量后加入２倍質(zhì)量的去離子水（樣品：水＝１：２），輕抖幾下使米粉平

?揚州大學博士學位論文???Ａ?Ｍ?ＬＴＰＢ?Ｌ－＾Ｚ＾－ＲＮＡｉ－ｌ?Ｌ－＾Ｚ／：Ａ－ＲＮＡｉ－２?Ｌ－＾Ｚ＾－ＲＮＡｉ－３??？＞?ｒｘ／?＾??ｂ?ｙ?ｙ?ｙ??Ｍ?／兮?ｖ，?Ｗ??圖２．５?乂ＬＳ：－ＲＮＡｉ轉基因水稻植株的ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ?２．５?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｄＺＡ＞ＲＮＡｉ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｒｉｃｅ?ｐｌａｎｔｓ．??注：（Ａ）龍?zhí)馗Ρ尘�；（Ｂ）珍汕９７Ｂ背景�??２．日本晴背景下ＡＬＫ基因敲除系的獲得及其鑒定：通過ＣＲＩＳＰＲ?Ｃａｓ９系統(tǒng)構建載體，??利用農(nóng)桿菌介導的方法獲得ｄＺＰ轉基因植株，從Ｔｏ代開始，利用潮霉素引物鑒定為陽性??的植株用引物ＡＬＫ－Ｃａｓ－Ｔｅｓｔ－Ｆ和ＡＬＫ－Ｃａｓ－Ｔｅｓｔ－Ｒ擴增片段后送測序公司測序（圖２．６）。??根據(jù)測序峰圖鑒定編輯類型以及是否純合，篩選出突變穩(wěn)定遺傳的株系用于稻米品質(zhì)測定。??＾?５＇ＵＴＲＥｘｏｎｌ?Ｅｘｏｎ２?Ｅｘｏｎ３?￡ｘｏｎ４?Ｅｘｏｎ６?Ｅｘｏｎ７?Ｅｘｏｎ８?３＇ＵＴＲ??Ｔａｒｇｅｔ?ｓｉｔｅ?Ｅｘｏｎ５??Ｂ?Ｎｉｐ－＾ＬＸａＣＣＣＴＴＴＧＧＣＴＧＧＧ?Ｍｉｐ－ａＺｆｃｆｌＣＣＣＴＴＴＴＧＧＣＴＧＧＧ??：?（；?ｆ：?ｒ，?Ｇ?Ｇ?ａ｜Ａ〇?Ａ?Ａ?１?Ｇ?Ｃ?Ｃ?Ｃ?Ｔ?Ｔ?￣?Ｇ?Ｇ?Ｃ?７?６?Ｇ?Ｇ?Ｇ?Ｇ?Ａ?Ａ?＇??ｊＪｗｙＬ遍?？ｓｍｕＬ編??圖２．６?ＡＬ＾－Ｃａｓ突變位點及測序鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ?２．６?ＡＬＫ－Ｃａｓ?ｔａｒｇｅｔ?ｓｉｔｅ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍｕｔａｔｉｏｎ?ｓｉｔｅ?ｉｎ?Ｎｉｐ－ａ／＾．??


本文編號：2990749