GLK基因是影響葉綠體發(fā)育,細胞分裂,衰老等的一個重要基因。從獼猴桃中克隆了1個與葉綠體發(fā)育有關的基因Ach17g471351.2（AchGLK）,該基因存在兩個不同的轉錄本,AchGLK^F和AchGLK⁺⁴⁸,兩者相差48 bp。AchGLK結構保守,C端有高度保守的GCT-box,DNA結合區(qū)域（DBD）有一段AREAEAA保守序列。AchGLK^F以及AchGLK⁺⁴⁸廣泛存在于紅陽獼猴桃各組織中以及不同品種的獼猴桃。AchGLK⁺⁴⁸過表達轉基因番茄與野生型番茄相比則無明顯差異。AchGLK^F過表達轉基因番茄未成熟的果實為深綠色,葉綠素a/b的含量顯著增加,質體數(shù)量增多,體積變大,葉綠體的數(shù)量也顯著增加,基質片層數(shù)量增加,但腔體大小無明顯差異。成熟的AchGLK^F轉基因番茄的果皮呈深紅顏色,帶有深色斑點。番茄紅素,β-類胡蘿卜素以及總類胡蘿卜素,葡萄糖、果糖、蔗糖以及可溶性固形物的含量均顯著提高。代謝組分析表明,AchGLK

【文章來源】：合肥工業(yè)大學安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
英文摘要
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 植物的Golden2 like轉錄因子
        1.1.1 轉錄因子Golden2 like影響葉綠體發(fā)育
        1.1.2 Golden2 like轉錄因子的進化與結構
        1.1.3 Golden2 like轉錄因子與環(huán)境脅迫
        1.1.4 Golden2 like轉錄因子的其他生物學功能
    1.2 基因工程技術提高果實營養(yǎng)品質
    1.3 青霉菌與水果采后病害
        1.3.1 青霉菌（Penicillium）的鑒定與分類
        1.3.2 青霉菌及其代謝物的應用
        1.3.3 青霉菌與基因組
    1.4 水果病害青霉菌與植物宿主之間的相互作用
        1.4.1 植物的免疫系統(tǒng)
        1.4.2 LysM家族蛋白與效應因子
    1.5 本課題研究的目的與意義
第二章 外源表達獼猴桃GLK基因提高番茄果實品質
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 數(shù)據(jù)集
        2.2.2 生物信息分析平臺和方法
        2.2.3 獼猴桃GLK基因的克隆與鑒定
        2.2.4 實驗材料
        2.2.5 實驗方法
    2.3 實驗結果與討論
        2.3.1 紅陽獼猴桃中GLK基因
        2.3.2 AchGLK基因的克隆
        2.3.3 獼猴桃AchGLK基因的2個轉錄本
        2.3.4 AchGLK的兩個轉錄本在紅陽獼猴桃中的表達譜
        2.3.5 AchGLK在番茄果實中的表達與表型
F的過表達提高番茄果實葉綠素的含量">        2.3.6 AchGLK^F的過表達提高番茄果實葉綠素的含量
F的過表達影響番茄果實葉綠體的發(fā)育">        2.3.7 AchGLK^F的過表達影響番茄果實葉綠體的發(fā)育
F的過表達提高番茄果實營養(yǎng)品質">        2.3.8 AchGLK^F的過表達提高番茄果實營養(yǎng)品質
F過表達成熟番茄代謝組分析">        2.3.9 AchGLK^F過表達成熟番茄代謝組分析
    2.4 本章小結
第三章 P.expansum效應因子與PeLysM家族基因
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 P.expansum效應因子的挖掘
        3.2.2 PeLysM家族基因預測
        3.2.3 PeLysM家族基因進化分析
        3.2.4 PeLysM家族基因的表達水平
        3.2.5 PeLysM家族基因的敲除
        3.2.6 △PeLysM突變體的鑒定
        3.2.7 △PeLysM突變體的表型分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 P.expansum分泌蛋白組
        3.3.2 P.expansum效應因子
        3.3.3 P.expansum核心效應因子和重要效應因子
        3.3.4 p.expansum含有19個PeLysM家族基因
        3.3.5 PeLysM家族蛋白進化分析與結構域
        3.3.6 PeLysM家族基因表達量各不相同
        3.3.7 PeLysM家族基因的敲除
        3.3.8 △PeLysM生長表型檢測
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第四章 PeLysM15基因及其突變體
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 PeLysM15基因的克隆
        4.2.2 PeLysM15編碼的蛋白質結構
        4.2.3 △PeLysM15在梨子上的擴展速度
        4.2.4 △PeLysM15在含有水果汁PDA平板上的擴展
        4.2.5 △PeLysM15在Cazpek培養(yǎng)基中的生長
4
+ 對△PeLysM15生長的抑制">        4.2.6 NH4
+ 對△PeLysM15生長的抑制
        4.2.7 野生型霉菌和△PeLysM15孢子管的測量
        4.2.8 酶的提取及酶活測定
        4.2.9 △PeLysM15侵染的蘋果組織和霉菌中ROS的檢測
        4.2.10 MDA的測定
4
4-N濃度的測定">        4.2.11 NH4
4-N濃度的測定
        4.2.12 霉菌侵染水果中SA含量的測定
        4.2.13 GC-MS檢測△PeLysM15的代謝物
        4.2.14 PeLysM15獼猴桃宿主相互作用的蛋白
    4.3 結果與分析
        4.3.1 △PeLysM15突變體在梨子的擴展速度快于野生型
        4.3.2 果汁對△PeLysM15突變體在PDA平板上擴展速度的影響
        4.3.3 △PeLysM15突變體在Cazpek培養(yǎng)基中的生長
        4.3.4 △PeLysM15基因突變影響孢子管發(fā)育
        4.3.5 PeLysM15基因序列
        4.3.6 PeLysM15蛋白含有果膠裂解酶結構區(qū)
        4.3.7 △PeLysM15基因突變引起氨代謝異常
        4.3.8 PeLysM15突變體氨基酸代謝途徑或輔酶代謝途徑發(fā)生改變
        4.3.9 銨離子誘導蘋果產(chǎn)生過量的活性氧
        4.3.10 過量的活性氧能夠較強的誘導蘋果的免疫系統(tǒng)
        4.3.11 過量的活性氧能夠較強的氧化宿主膜系統(tǒng)
        4.3.12 PeLysM15基因突變體中果膠裂解酶活性下降果膠酶活性上升
        4.3.13 PeLysM15酵母篩庫結果
    4.4 討論
    4.5 本章小結
第五章 問題與展望
參考文獻
附錄A P. expansum研究所用引物
附錄B P.expansum重要的效應因子
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物細胞壁在植物與病原菌互作中的作用[J]. 梁艷麗,趙婧,劉林,楊靜,李成云.  分子植物育種. 2016(05)
[2]獼猴桃AcGLK2a基因過表達載體的構建及在番茄中的遺傳轉化[J]. 周昂,牛向麗,劉永勝.  合肥工業(yè)大學學報(自然科學版). 2015(02)
[3]一種用于PCR擴增的絲狀真菌DNA快速提取方法[J]. 潘力,崔翠,王斌.  微生物學通報. 2010(03)
[4]Calcium at the Cell Wall-Cytoplast Interface[J]. Peter K.Hepler,Lawrence J.Winship.  Journal of Integrative Plant Biology. 2010(02)



本文編號：2969570

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