[目的]原發(fā)性高血壓是最常見(jiàn)的危害人體健康的心血管疾病,是在遺傳易感的基礎(chǔ)上,多種環(huán)境因素綜合作用的結(jié)果。高血壓病的病因病理機(jī)制復(fù)雜,其中鈉肽家族及其受體起著舉足輕重的作用。前人及我們前期的研究均發(fā)現(xiàn)高血壓患者存在NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性,并影響高血壓病的發(fā)生,但其在病理機(jī)制中的作用并不清楚。NPR-C基因A-55C位點(diǎn)處于基因表達(dá)調(diào)控區(qū),推測(cè)該位點(diǎn)多態(tài)性有可能影響NPR-C表達(dá),進(jìn)而影響其對(duì)配體ANP的清除,或影響NPR-C及其配體結(jié)合后的信號(hào)通路。為此,本研究試圖通過(guò)對(duì)高血壓病患者NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性與外周血調(diào)節(jié)血壓相關(guān)因素的分析,對(duì)上述假設(shè)給予求證。[研究方法]1.研究對(duì)象及樣本采集根據(jù)高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《2010年高血壓防治指南》,排除繼發(fā)性高血壓者。剔除研究對(duì)象的民族界定不清或基本特征指標(biāo)信息不清者。從昆明市第一人民醫(yī)院體檢、門(mén)診和住院患者中,篩選出100例云南漢族原發(fā)性高血壓患者作為研究對(duì)象（父系、母系三代均為漢族,均居住云南境內(nèi)）,年齡在40-80之間,其中男48例,女52例。采集患者空腹靜脈血進(jìn)行患者NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性、血脂血... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１不同引物量ＰＣＲ反應(yīng)體系擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??＿＿

１?２?３?４?５?Ｍ???６００ｂｐ???４００ｂｐ???ｌＯＯｂｐ??圖２－２不同模板量ＰＣＲ反應(yīng)體系擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??注：Ｍ為ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜５分別為加入５｜ｉＬ、４（ａＬ、３ｐＬ、２（ｉＬ、ｌ（ｉＬ模板量下擴(kuò)增??產(chǎn)物電泳結(jié)果??２．?１．?３目的片段ＰＣＲ擴(kuò)增體系優(yōu)化結(jié)果??經(jīng)引物量和模板量?jī)?yōu)化，最終確定用以下ＰＣＲ擴(kuò)增體系對(duì)患者樣本進(jìn)行??目的片段擴(kuò)增。??試劑?反應(yīng)體系??ＤｒｅａｍＴａｑ?Ｇｒｅｅｎ?ＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ??、?２５?ｌｉＬ??Ｍｉｘ?（２Ｘ）??正向引物?０．?５ｐＪＬ??反向引物?０．?５ｐＬ??ＤＮＡ?模板?３?ｆｉＬ??無(wú)核酸酶水?２１?ｐＬ??ＰＣＲ擴(kuò)增總量?５０?ｐＬ??２．?１．?４?ＰＣＲ擴(kuò)增反應(yīng)條件中退火溫度優(yōu)化??分別用１２個(gè)梯度的退火溫度進(jìn)行目的片段ＰＣＲ擴(kuò)增，其產(chǎn)物電泳結(jié)果見(jiàn)圖??２－３。圖中顯示，退火溫度為５８°Ｃ的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶亮（７號(hào)電泳條帶），且??非特異性條帶少，故選擇為最佳退火溫度。??２８??

１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?Ｍ??｜?ｔ?６００ｂｐ??＾￣１，ｖ，！，；??Ｕｌ?■???圖２－３不同退火溫度下目的片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??注：Ｍ為?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜１２?分別為?６２．Ｃ，６１．６－Ｃ，?６１．３．Ｃ，?６０．６Ｘ：，５９．７Ｘ：，５８．９．Ｃ，?５８。０??５７．?３°Ｃ，?５６．４＇Ｃ，?５５．?７°Ｃ，?５５．４°Ｃ，?５５°Ｃ退火溫度下目的片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??２．?１．５目的片段ＰＣＲ擴(kuò)增反應(yīng)條件的優(yōu)化結(jié)果，??經(jīng)退火溫度優(yōu)化，最終確定用以下ＰＣＲ擴(kuò)增條件對(duì)患者樣本進(jìn)行目的片段??擴(kuò)增。??Ｉ＃??預(yù)變性?９５°Ｃ?３?ｍｉｎ??變性?９６°Ｃ?５０?ｓ?－＞??退火?５８Ｖ?５０?ｓ?＿循環(huán)??３０次??延伸?７２?°Ｃ?６０ｓ??＿??末端延伸?７２°Ｃ?５?ｍｉｎ??２．?２目的片段ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果??將４份患者標(biāo)本的目的基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程上海測(cè)序部進(jìn)行??正、反向測(cè)序以驗(yàn)證ＮＰＲ－Ｃ基因Ａ－５５Ｃ位點(diǎn)所在目的片段ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物的特??異性，其測(cè)序結(jié)果的ＤＮＡ堿基序列見(jiàn)表２－１，測(cè)序峰值圖見(jiàn)圖２－４。通過(guò)與??ｇｅｎｅＢａｎｋ中的目的序列比對(duì)同源性為９６％。??２９??


本文編號(hào)：2965458