NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性在高血壓病理機(jī)制中作用的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-01-08 22:52
[目的]原發(fā)性高血壓是最常見(jiàn)的危害人體健康的心血管疾病,是在遺傳易感的基礎(chǔ)上,多種環(huán)境因素綜合作用的結(jié)果。高血壓病的病因病理機(jī)制復(fù)雜,其中鈉肽家族及其受體起著舉足輕重的作用。前人及我們前期的研究均發(fā)現(xiàn)高血壓患者存在NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性,并影響高血壓病的發(fā)生,但其在病理機(jī)制中的作用并不清楚。NPR-C基因A-55C位點(diǎn)處于基因表達(dá)調(diào)控區(qū),推測(cè)該位點(diǎn)多態(tài)性有可能影響NPR-C表達(dá),進(jìn)而影響其對(duì)配體ANP的清除,或影響NPR-C及其配體結(jié)合后的信號(hào)通路。為此,本研究試圖通過(guò)對(duì)高血壓病患者NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性與外周血調(diào)節(jié)血壓相關(guān)因素的分析,對(duì)上述假設(shè)給予求證。[研究方法]1.研究對(duì)象及樣本采集根據(jù)高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《2010年高血壓防治指南》,排除繼發(fā)性高血壓者。剔除研究對(duì)象的民族界定不清或基本特征指標(biāo)信息不清者。從昆明市第一人民醫(yī)院體檢、門(mén)診和住院患者中,篩選出100例云南漢族原發(fā)性高血壓患者作為研究對(duì)象(父系、母系三代均為漢族,均居住云南境內(nèi)),年齡在40-80之間,其中男48例,女52例。采集患者空腹靜脈血進(jìn)行患者NPR-C基因A-55C位點(diǎn)多態(tài)性、血脂血...
【文章來(lái)源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】:73 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2-1不同引物量PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??__
1?2?3?4?5?M???600bp???400bp???lOObp??圖2-2不同模板量PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??注:M為DNAMarker,卜5分別為加入5|iL、4(aL、3pL、2(iL、l(iL模板量下擴(kuò)增??產(chǎn)物電泳結(jié)果??2.?1.?3目的片段PCR擴(kuò)增體系優(yōu)化結(jié)果??經(jīng)引物量和模板量?jī)?yōu)化,最終確定用以下PCR擴(kuò)增體系對(duì)患者樣本進(jìn)行??目的片段擴(kuò)增。??試劑?反應(yīng)體系??DreamTaq?Green?PCR?Master??、?25?liL??Mix?(2X)??正向引物?0.?5pJL??反向引物?0.?5pL??DNA?模板?3?fiL??無(wú)核酸酶水?21?pL??PCR擴(kuò)增總量?50?pL??2.?1.?4?PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件中退火溫度優(yōu)化??分別用12個(gè)梯度的退火溫度進(jìn)行目的片段PCR擴(kuò)增,其產(chǎn)物電泳結(jié)果見(jiàn)圖??2-3。圖中顯示,退火溫度為58°C的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶亮(7號(hào)電泳條帶),且??非特異性條帶少,故選擇為最佳退火溫度。??28??
1?2?3?4?5?6?7?8?9?10?11?12?M??|?t?600bp??^ ̄1,v,!,;??Ul?■???圖2-3不同退火溫度下目的片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??注:M為?DNAMarker,卜12?分別為?62.C,61.6-C,?61.3.C,?60.6X:,59.7X:,58.9.C,?58。0??57.?3°C,?56.4'C,?55.?7°C,?55.4°C,?55°C退火溫度下目的片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??2.?1.5目的片段PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件的優(yōu)化結(jié)果,??經(jīng)退火溫度優(yōu)化,最終確定用以下PCR擴(kuò)增條件對(duì)患者樣本進(jìn)行目的片段??擴(kuò)增。??I#??預(yù)變性?95°C?3?min??變性?96°C?50?s?->??退火?58V?50?s?_循環(huán)??30次??延伸?72?°C?60s??_??末端延伸?72°C?5?min??2.?2目的片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果??將4份患者標(biāo)本的目的基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程上海測(cè)序部進(jìn)行??正、反向測(cè)序以驗(yàn)證NPR-C基因A-55C位點(diǎn)所在目的片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的特??異性,其測(cè)序結(jié)果的DNA堿基序列見(jiàn)表2-1,測(cè)序峰值圖見(jiàn)圖2-4。通過(guò)與??geneBank中的目的序列比對(duì)同源性為96%。??29??
本文編號(hào):2965458
【文章來(lái)源】:昆明醫(yī)科大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】:73 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2-1不同引物量PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果??__
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本文編號(hào):2965458
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