[目的]原發(fā)性高血壓是最常見的危害人體健康的心血管疾病,是在遺傳易感的基礎上,多種環(huán)境因素綜合作用的結果。高血壓病的病因病理機制復雜,其中鈉肽家族及其受體起著舉足輕重的作用。前人及我們前期的研究均發(fā)現(xiàn)高血壓患者存在NPR-C基因A-55C位點多態(tài)性,并影響高血壓病的發(fā)生,但其在病理機制中的作用并不清楚。NPR-C基因A-55C位點處于基因表達調(diào)控區(qū),推測該位點多態(tài)性有可能影響NPR-C表達,進而影響其對配體ANP的清除,或影響NPR-C及其配體結合后的信號通路。為此,本研究試圖通過對高血壓病患者NPR-C基因A-55C位點多態(tài)性與外周血調(diào)節(jié)血壓相關因素的分析,對上述假設給予求證。[研究方法]1.研究對象及樣本采集根據(jù)高血壓的診斷標準:參照《2010年高血壓防治指南》,排除繼發(fā)性高血壓者。剔除研究對象的民族界定不清或基本特征指標信息不清者。從昆明市第一人民醫(yī)院體檢、門診和住院患者中,篩選出100例云南漢族原發(fā)性高血壓患者作為研究對象（父系、母系三代均為漢族,均居住云南境內(nèi)）,年齡在40-80之間,其中男48例,女52例。采集患者空腹靜脈血進行患者NPR-C基因A-55C位點多態(tài)性、血脂血... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１不同引物量ＰＣＲ反應體系擴增產(chǎn)物電泳結果??＿＿

１?２?３?４?５?Ｍ???６００ｂｐ???４００ｂｐ???ｌＯＯｂｐ??圖２－２不同模板量ＰＣＲ反應體系擴增產(chǎn)物電泳結果??注：Ｍ為ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜５分別為加入５｜ｉＬ、４（ａＬ、３ｐＬ、２（ｉＬ、ｌ（ｉＬ模板量下擴增??產(chǎn)物電泳結果??２．?１．?３目的片段ＰＣＲ擴增體系優(yōu)化結果??經(jīng)引物量和模板量優(yōu)化，最終確定用以下ＰＣＲ擴增體系對患者樣本進行??目的片段擴增。??試劑?反應體系??ＤｒｅａｍＴａｑ?Ｇｒｅｅｎ?ＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ??、?２５?ｌｉＬ??Ｍｉｘ?（２Ｘ）??正向引物?０．?５ｐＪＬ??反向引物?０．?５ｐＬ??ＤＮＡ?模板?３?ｆｉＬ??無核酸酶水?２１?ｐＬ??ＰＣＲ擴增總量?５０?ｐＬ??２．?１．?４?ＰＣＲ擴增反應條件中退火溫度優(yōu)化??分別用１２個梯度的退火溫度進行目的片段ＰＣＲ擴增，其產(chǎn)物電泳結果見圖??２－３。圖中顯示，退火溫度為５８°Ｃ的擴增產(chǎn)物電泳條帶亮（７號電泳條帶），且??非特異性條帶少，故選擇為最佳退火溫度。??２８??

１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?Ｍ??｜?ｔ?６００ｂｐ??＾￣１，ｖ，！，；??Ｕｌ?■???圖２－３不同退火溫度下目的片段擴增產(chǎn)物電泳結果??注：Ｍ為?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜１２?分別為?６２．Ｃ，６１．６－Ｃ，?６１．３．Ｃ，?６０．６Ｘ：，５９．７Ｘ：，５８．９．Ｃ，?５８。０??５７．?３°Ｃ，?５６．４＇Ｃ，?５５．?７°Ｃ，?５５．４°Ｃ，?５５°Ｃ退火溫度下目的片段擴增產(chǎn)物電泳結果??２．?１．５目的片段ＰＣＲ擴增反應條件的優(yōu)化結果，??經(jīng)退火溫度優(yōu)化，最終確定用以下ＰＣＲ擴增條件對患者樣本進行目的片段??擴增。??Ｉ＃??預變性?９５°Ｃ?３?ｍｉｎ??變性?９６°Ｃ?５０?ｓ?－＞??退火?５８Ｖ?５０?ｓ?＿循環(huán)??３０次??延伸?７２?°Ｃ?６０ｓ??＿??末端延伸?７２°Ｃ?５?ｍｉｎ??２．?２目的片段ＰＣＲ擴增產(chǎn)物測序結果??將４份患者標本的目的基因ＰＣＲ擴增產(chǎn)物送生工生物工程上海測序部進行??正、反向測序以驗證ＮＰＲ－Ｃ基因Ａ－５５Ｃ位點所在目的片段ＰＣＲ擴增產(chǎn)物的特??異性，其測序結果的ＤＮＡ堿基序列見表２－１，測序峰值圖見圖２－４。通過與??ｇｅｎｅＢａｎｋ中的目的序列比對同源性為９６％。??２９??


本文編號：2965458