為探究BpJMJ18基因在植物生長發(fā)育過程中的功能,本研究利用PCR技術(shù)克隆白樺(Betula platyphylla)BpJMJ18基因的啟動子,通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),該啟動子序列中除了包含TATA-box和CAAT-box等基本順式作用元件外,還具有光響應(yīng)元件和多種激素應(yīng)答相關(guān)的元件;進(jìn)而構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI101-BpJMJ18pro::GUS,并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時轉(zhuǎn)化法侵染白樺,對轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行GUS染色分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)BpJMJ18基因啟動子能夠驅(qū)動GUS基因在白樺的主根、側(cè)根、根尖、葉片的維管束和嫩莖中均檢測到表達(dá)。上述結(jié)果說明白樺BpJMJ18啟動子具有啟動活性,可能影響植物的生長發(fā)育。

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【部分圖文】：

圖1 Bp JMJ18基因在白樺不同組織表達(dá)分析

為了研究白樺BpJMJ18基因在各個組織部位的表達(dá)情況，提取白樺頂芽、幼葉、成熟葉、初生莖、過渡莖、成熟莖及根的totalRNA，進(jìn)行熒光定量PCR檢測，結(jié)果如圖1所示。表明BpJMJ18基因在各個組織部位中均有所表達(dá)，且BpJMJ18基因的表達(dá)模式在根和幼葉中的表達(dá)水平....

圖2 白樺Bp JMJ18基因啟動子的克隆及鑒定A.Bp JMJ18啟動子的克隆(M.DNA marker DL5000;1.JMJ18啟動子的PCR擴增產(chǎn)物);B.p EASY-Bp JMJ18pro載體在大腸桿菌菌液中的PCR檢測(M.DNA marker DL5000;1～6.p EASY-Bp JMJ18pro轉(zhuǎn)化子的菌液PCR檢測;7．陰性對照)

將測序正確的pEASY-Blunt-BpJMJ18pro菌液提取質(zhì)粒，利用限制性內(nèi)切酶HindⅢ對pEASY-Blunt-BpJMJ18pro和pBI101-GUS進(jìn)行單酶切(見圖4A)，回收目的片段，利用TaKaRa公司的SolutionⅠ進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌(....

圖3 Bp JMJ18啟動子作用元件示意圖

圖2白樺BpJMJ18基因啟動子的克隆及鑒定A.BpJMJ18啟動子的克隆(M.DNAmarkerDL5000;1.JMJ18啟動子的PCR擴增產(chǎn)物);B.pEASY-BpJMJ18pro載體在大腸桿菌菌液中的PCR檢測(M.DNAmarkerDL5000;1～....

圖4 植物表達(dá)載體p BI101-Bp JMJ18pro::GUS的構(gòu)建及驗證A．限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的結(jié)果(M.DNA marker DL5000;1.p EASY-Blunt-Bp JMJ18pro單酶切條帶;2．質(zhì)粒p BI101-GUS的單酶切條帶);B．植物表達(dá)載體p BI101-Bp JMJ18pro::GUS的菌液PCR檢測(M.DNA marker DL5000;1～7.p BI101-Bp JMJ18pro::GUS菌液的PCR產(chǎn)物;8．陰性對照);C.GV3101-p BI101-Bp JMJ18pro::GUS的菌液PCR檢測(M.DNA marker DL5000;1～9．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子的菌液PCR檢測;10．陰性對照)

為了進(jìn)一步驗證BpJMJ18啟動子在白樺中的表達(dá)活性，我們將用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時轉(zhuǎn)化法侵染白樺組培苗，進(jìn)行了3次重復(fù)試驗并通過GUS染色觀察其表達(dá)特征。結(jié)果如圖5A所示，發(fā)現(xiàn)BpJMJ18啟動子驅(qū)動的GUS基因在白樺的主根、側(cè)根、根尖、葉片的維管束和嫩莖中均檢測到表達(dá)，在老莖中....

本文編號：4027573