發(fā)布時(shí)間：2025-01-15 16:57

　　 多氧霉素是一種抑制幾丁質(zhì)生物合成的廣譜抗真菌類抗生素,對(duì)多種真菌引起的農(nóng)作物病害具有顯著的防治效果,且對(duì)人和動(dòng)植物無(wú)害,是一種綠色安全的生物農(nóng)藥,目前仍然是全球應(yīng)用最廣泛的抗真菌農(nóng)藥之一。多氧霉素的主要作用機(jī)制在于競(jìng)爭(zhēng)性抑制真菌細(xì)胞壁合成中幾丁質(zhì)合成酶的活性,因此對(duì)農(nóng)作物真菌病害具有顯著的防治效果�，F(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展對(duì)于綠色生物農(nóng)藥的需求日益增長(zhǎng),本研究的目的是構(gòu)建多氧霉素關(guān)鍵活性成分——多氧霉素B的高產(chǎn)菌株。從一株自土壤環(huán)境中分離得到的金色鏈霉菌（Streptomyces ansochromogenes）出發(fā),首先通過紫外誘變初步篩選多氧霉素B的高產(chǎn)突變菌株;然后利用ExoCET直接克隆技術(shù)對(duì)多氧霉素基因簇pol進(jìn)行克隆,并在基因簇第1個(gè)基因上游分別添加原始啟動(dòng)子和kas Op*強(qiáng)啟動(dòng)子,通過整合酶phi C31將基因簇整合到突變株染色體上構(gòu)建pol倍增菌株,HPLC-MS檢測(cè)比較多氧霉素B的產(chǎn)量。通過紫外誘變育種和篩選獲得了鏈霉菌突變株P(guān)ol-12菌株,其產(chǎn)量較野生型菌株提高了1.2倍。為進(jìn)一步提高多氧霉素產(chǎn)量,利用ExoCET直接克隆技術(shù)將pol克隆至p15A載體,并通過接合轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)化...

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【部分圖文】：

圖2 鏈霉菌S.ansochromogenes Pol-12的基因組及其限制性內(nèi)切酶Bsr DⅠ酶切產(chǎn)物M—Takara DL10 000 DNA Marker;1—S.ansochromogenes Pol-12的基因組DNA;2—S.ansochromogenes Pol-12基因組DNA的Bsr DⅠ酶切產(chǎn)物

來(lái)源于噬菌體的Red/ET重組酶可以在大腸桿菌中介導(dǎo)一個(gè)線性DNA分子和一個(gè)環(huán)狀DNA分子發(fā)生重組，簡(jiǎn)稱線環(huán)重組（linear-circularhomolo‐gousrecombination,LCHR）。為了方便下一步接合轉(zhuǎn)移和位點(diǎn)特異性元件的插入，將含有篩選標(biāo)記阿泊拉霉素....

圖1 多氧霉素的結(jié)構(gòu)與組成[6]

多氧霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)與幾丁質(zhì)合成酶（chitinsynthase）的底物尿苷二磷酸酯-N-乙酰氨基葡萄糖（UDP-GlcNAc）相似，因而能夠競(jìng)爭(zhēng)性抑制真菌細(xì)胞壁中幾丁質(zhì)的合成，導(dǎo)致細(xì)胞因滲透壓差異而裂解[3-4]。Isono等[3,5-7]將可可鏈霉菌阿蘇變種的發(fā)酵液進(jìn)行多步....

圖3 直接克隆載體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

圖2鏈霉菌S.ansochromogenesPol-12的基因組及其限制性內(nèi)切酶BsrDⅠ酶切產(chǎn)物M—TakaraDL10000DNAMarker;1—S.ansochromogenesPol-12的基因組DNA;2—S.ansochromogenesPol-1....

圖4 多氧霉素基因簇的直接克隆

圖3直接克隆載體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物2.3.2原始啟動(dòng)子、kasOp*啟動(dòng)子以及接合轉(zhuǎn)移和位點(diǎn)特異性整合元件的插入

本文編號(hào)：4027589