研究背景與目的:碳青霉烯類抗菌藥物是一類抗菌譜廣、抗菌作用強、不良反應(yīng)發(fā)生率低的藥物,但是隨著這類藥物的不當使用,使得耐藥率隨之上升,腸桿菌科細菌是目前對碳青霉烯類抗菌藥物產(chǎn)生耐藥的主要菌群。腸桿菌科細菌對碳青霉烯酶耐藥機制主要分為三類:（1）膜通透性的改變;（2）藥物作用靶點的改變;（3）產(chǎn)碳青霉烯酶。研究表明,產(chǎn)碳青霉烯酶是腸桿菌科細菌最主要的耐藥機制。編碼碳青霉烯酶的基因通常位于可移動的元件上,如質(zhì)粒、整合子、插入序列等,易在細菌間橫向傳播,造成耐藥菌的流行和爆發(fā)。碳青霉烯酶（Carbapenemase）可根據(jù)Ambler分類分為三類（A、B和D類）,A類酶包括KPC、GES、SME等,B類酶包括IMP、NDM、VIM等,D類包括OXA-23、OXA-48等。雖然種類繁多,但全球范圍內(nèi)主要流行5種碳青霉烯酶:KPC（Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase）、NDM（New Delhi Metallo-lactamase）、VIM（Verona Integron-encoded Metallo-lactamase）、IMP（Imipenem-resi... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?ＭＴ－ＰＣＲ檢測５種碳青霉烯酶基因的檢測限分析??

?第四章基于線性指數(shù)ＰＣＲ的側(cè)流層析技術(shù)檢測ｂｌａＩＭＰ???Ａ１?Ａ２?Ｂ１?Ｂ２??圖４－３固定用戊二醛交聯(lián)ＢＳＡ和氨基標記探針的側(cè)流層析試紙條檢測ＬＡＴＥ－ＰＣＲ產(chǎn)??物的結(jié)果??Ｆｉｇ．?４－３?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＬＡＴＥ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＬＦＡ?ｏｆ?ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ??ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ?ＢＳＡ?ａｎｄ?ａｍｉｎｏ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ??圖注：Ａｌ、Ａ２：戊二醛交聯(lián)ＢＳＡ和氨基標記的探針，固定在測流層析試紙條上檢測??ＬＡＴＥ－ＰＣＲ產(chǎn)物，３０ｍｉｎ后觀察沒有條帶，１２ｈ觀察無條帶；Ｂｌ、Ｂ２：?ＥＤＣ－ＮＨＳ交聯(lián)ＢＳＡ和??氨基標記的探針，固定在測流層析試紙條上檢測ＬＡＴＥ－ＰＣＲ產(chǎn)物，３０ｍｉｎ后觀察沒有條帶。??１２ｈ后觀察產(chǎn)生條帶。??（３）?地高辛（Ｄｉｇ）標記探針和地高辛抗體反應(yīng)后，固定在側(cè)流層析試紙條??上檢測ＬＡＴＥ－ＰＣＲ產(chǎn)物，半小時后觀察結(jié)果。未在層析緩沖液中加０．０７％酪蛋??白封閉試紙條多余的抗Ｄｉｇ抗體，陽性對照和陰性對照產(chǎn)生較為明顯的條帶。??當在層析緩沖液中加入０．０７％酪蛋白封閉試紙條上多余的抗地高辛抗體時，陽??性對照產(chǎn)生明顯條帶，而陰性對照未產(chǎn)生條帶。??５０??

?碩士學位論文???ｉ－?ｄ－??＜（Ｓｉ??圖４－４固交聯(lián)ａｎｔｉ－Ｄｉｇ抗體的Ｄｉｇ標記探針的側(cè)流層析試紙條檢測ＬＡＴＥ－ＰＣＲ產(chǎn)物的結(jié)??果??Ｆｉｇ．?４－４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＬＡＴＥ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｂｙ?ＬＦＡ?ｏｆ?Ｄｉｇ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ?ｗｉｔｈ?Ａｎｔｉ??Ｄｉｇ?ａｎｔｉｂｏｄｙ??圖注：Ｃｌ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４：地高辛標記探針與抗地高辛抗體交聯(lián)后，固定于試紙條３７°Ｃ??干燥３ｈ后，檢測ＬＡＴＥ－ＰＣＲ產(chǎn)物的結(jié)果；Ｃｌ、Ｃ２：在Ｒｕｎｎｉｎｇ?Ｂｕｆｆｅｒ中未加入０．０７％酪??蛋白：Ｃ３、Ｃ４：在Ｒｕｎｎｉｎｇ?Ｂｕｆｆｅｒ中未加入０．０７％酪蛋白。Ｃｌ、Ｃ３，為陽性對照，Ｃ２、??Ｃ４為陰性對照。??第五節(jié)結(jié)果討論??產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌的出現(xiàn)，使得患者的死亡率升高。近年來產(chǎn)碳青霉烯??酶耐藥菌更是呈現(xiàn)爆發(fā)的趨勢。因此我們急需一種快速準確的檢測ＣＰＥ方法，??以便為患者提供快速、及時，有針對性的治療方案，限制ＣＰＥ快速傳播。??側(cè)流層析實驗是一種簡便而有效的分析工具，無需使用復(fù)雜設(shè)備的情況下即??可快速的檢測目標分析物是否存在。但是普通的側(cè)流層析試紙條檢測限較低。??當前提高側(cè)流層析試紙條檢測限的方法主要分為兩種：一種是擴大檢測區(qū)域的??５１??


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