發(fā)布時間：2020-12-22 15:44

　　[目的]以健康組為對照,研究不同疾病分離的馬拉色菌的基因型、藥敏、脂肪酶活性,并分析其相關(guān)性。[方法]1.對分離自花斑糠疹、馬拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎三種疾病和健康人皮膚的馬拉色菌菌株進行DNA的提取,采用真菌通用引物ITS1/ITS4及NL1/NL4對致病菌rDNA的ITS區(qū)及DI/D2區(qū)進行PCR擴增并測序,堿基序列通過Sequencher軟件拼接,用BLAST與Genebank的數(shù)據(jù)庫進行比對進行菌種鑒定,并將各個菌株序列使用CLUSTAL序列分析軟件進行多重比較,再通過Mega軟件構(gòu)建N-J系統(tǒng)樹,通過系統(tǒng)發(fā)育樹明確各個菌株親緣性的遠近。2.用脂肪酶活性測定試劑盒進行馬拉色菌脂肪酶活性測定。3.結(jié)合前期藥敏結(jié)果,分析馬拉色菌基因型和藥敏、脂肪酶活性之間的相關(guān)性。[結(jié)果]1. ITS區(qū)成功測序93株菌,D1/D2區(qū)成功測序98株菌,二者相比,D1/D2區(qū)測試成功率更高,二者測序比對結(jié)果完全一致。2.分子鑒定與傳統(tǒng)方法鑒定（即生理生化形態(tài)學鑒定方法）結(jié)果相比較,二者鑒定結(jié)果一致性為58% （57/98）。3.分子鑒定結(jié)果顯示,三種疾病的優(yōu)勢菌種為合軸馬拉色菌和糠秕馬拉色菌（分別占三... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

為真菌熒光染液染色

熒光染色液是一種快速檢測真菌的新型染色液，的真菌細胞壁Ｐ－多糖結(jié)合，如幾丁質(zhì)和纖維素等，行檢測。?克墨水染色?圖２為真菌熒純化??ｍｍ的橄欖油培養(yǎng)基平板，待分離的馬拉色菌在育５－１４天，然后挑取單菌落于斜面橄欖油培養(yǎng)＾一？

圖５過氧化氫酶實驗陽性??吐溫試驗??－２０、２％吐溫－４０、２％吐溫－６０、２％吐溫－８０分別加入沙堡ｉｎ滅菌后備用，在直徑９ｃｍ的無菌平皿中制成４種吐溫培養(yǎng)色菌制成２個麥氏單位（約相當于１０７菌量）的菌懸液，取吐溫培養(yǎng)基上，３５°Ｃ培養(yǎng)７２小時，觀察菌落生長情況�？吠聹嘏囵B(yǎng)基上均能生長，合軸馬拉色菌在吐溫－２０培養(yǎng)基上菌在吐溫－８０培養(yǎng)基上生長較差（生長面積明顯小于另外３長，在其余吐溫培養(yǎng)基上生長良好，鈍形馬拉色菌、球形在４種吐溫培養(yǎng)基上均無生長。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]山蒼子油及其分別與酮康唑、伊曲康唑及氟康唑聯(lián)合抗馬拉色菌的體外藥敏試驗[J]. 黃云麗,李紅賓,許雪,李玉葉,董天祥.  臨床皮膚科雜志. 2016(08)
[2]非培養(yǎng)DNA提取法鑒定馬拉色菌菌種[J]. 張浩,冉玉平,謝震,代亞玲.  中國皮膚性病學雜志. 2014(03)
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[4]花斑糠疹和馬拉色菌毛囊炎致病菌菌種分析[J]. 耿承芳,占萍,陶麗,李智華,江清,金云,羅云鵬.  中國皮膚性病學雜志. 2011(01)
[5]糠秕馬拉色菌菌絲態(tài)和酵母態(tài)細胞差異表達片段的篩選[J]. 閆薇,冉玉平,梁作輝,夏慶杰,閆乃紅,張浩.  中國皮膚性病學雜志. 2009(12)
[6]從花斑糠疹皮損分離的馬拉色菌隨機擴增多態(tài)性DNA研究[J]. 謝震,冉玉平,劉瑞,楊如學,李志瑜,代亞玲.  中華皮膚科雜志. 2009 (08)
[7]正常人耵聹中馬拉色菌菌種構(gòu)成研究[J]. 張浩,冉玉平,青春,代亞玲,向耘.  中國真菌學雜志. 2007(02)
[8]花斑癬患者皮屑中馬拉色菌的巢式PCR法分析[J]. 趙秀紅,冉玉平,熊琳,周光平,山崎Masashi,坪井良治,小川秀興.  西部醫(yī)學. 2004(01)



本文編號：2932013