實(shí)驗(yàn)室前期以寧夏枸杞“寧杞1號(hào)”及其雄性不育突變體“寧杞5號(hào)”為材料,在分析其花藥差異蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)上,分離克隆了一個(gè)差異表達(dá)基因,經(jīng)生物信息學(xué)分析得知,該基因?qū)儆赗2R3-MYB類轉(zhuǎn)錄因子家族基因,命名為LbMYB103。在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)探究了枸杞LbMYB103基因的表達(dá)特征及其在植物生長發(fā)育過程中的調(diào)控作用,為明確該基因在枸杞生長及花藥發(fā)育過程中可能的調(diào)控機(jī)制奠定一定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下.:（1）以“寧杞1號(hào)”枸杞五個(gè)發(fā)育時(shí)期的花藥為材料,利用熒光定量PCR技術(shù)分析LbMYB103基因隨花藥發(fā)育過程的表達(dá)特征。結(jié)果表明,LbMYB103基因在花藥造孢細(xì)胞時(shí)期開始表達(dá),小孢子母細(xì)胞時(shí)期表達(dá)量增加,四分體時(shí)期達(dá)到峰值,后期逐漸降低。（2）構(gòu)建LbMYB103基因的原核表達(dá)載體LbMYB103-pET32a-BL21,利用IPTG進(jìn)行體外誘導(dǎo),經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分析得知,該基因能夠在體外進(jìn)行表達(dá)。（3）利用RT-PCR技術(shù)分離得到LbMYB103基因的完整開放閱讀框（ORF）,構(gòu)建植物過表達(dá)載體LbMYB103-pCAMBIA2301-LBA4404,并通過根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－４?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＥＴ３２ａ－ＢＬ２１菌檢及酶切鑒定??Ｆｉｇ３－４?Ｃｏｌｏｎｙ?ＰＣＲ?ａｎｄ?ｅｎｚｙｍｅｓ?ｏｆ?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＥＴ３２ａ－ＢＬ２１??

LbMYBt03}CAMB1A2301-Iry的構(gòu)趁

?３結(jié)果分析與討論??以測序正確的ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ?Ｖｅｃｔｏｒ?yàn)槟０暹M(jìn)行亞克隆，大量擴(kuò)增回收目的條帶，??經(jīng)Ｑｕｉｃｋｃｕｔ？ＳａｃＩ／ＸｂａＩ雙酶切后繼續(xù)用瓊脂糖凝膠電泳回收（圖３－７，?Ａ），抽提ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ??植物表達(dá)載體同樣用Ｓａｃｌ／Ｘｂａｌ雙酶切回收（圖３－７，?Ｂ），過夜連接并轉(zhuǎn)化ＤＨ５ａ大腸桿菌（圖??３－７，?Ｃ）。ＰＣＲ鑒定轉(zhuǎn)化子（圖３－８，?Ａ），選擇結(jié)果為陽性的單克隆進(jìn)行培養(yǎng)，抽提質(zhì)粒雙酶??切驗(yàn)證（圖３－８，?Ｂ），ＰＣＲ和雙酶切檢測結(jié)果一致，均到一條與目標(biāo)條帶相符的，大小為９７５?ｂｐ??的特異性條帶，表明ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ－ＤＨ５ａ構(gòu)建成功。??Ａ?．?＿２?３?４?Ｂ?１?Ｌ?３一＾１??■?＿??１?５ｂｐ??７?５０ｂｏ?；?丨丨??＾?１■卿??圖?３－８?ＬｂＭＹＢ１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ｋｙ?的鑒定??Ｆｉｇ３－８?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬｂＭＹＢ?１０３－ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１?－ｋｙ??注：Ａ，重組子ＰＣＲ鑒定；Ｂ，重組子雙酶切鑒定??（Ａ）?Ｍ，ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；ｌ－４，ＰＣＲ?鑒定結(jié)果；（Ｂ）Ｍ，ＤＬ１５０００?Ｍａｒｋｅｒ；Ｍｌ，ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；ｌ，質(zhì)粒；２，重組質(zhì)粒；３，Ｓａｃｌ?單酶??切重組質(zhì)粒；４，?Ｓａｃｌ／Ｘｂａｌ雙酶切重組質(zhì)粒??Ｎｏｔｅ：?Ａ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]轉(zhuǎn)錄因子MYB103調(diào)控花藥發(fā)育分子機(jī)理以及絨氈層發(fā)育與功能轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑的研究[D]. 朱駿.上海交通大學(xué) 2010

碩士論文
[1]一個(gè)新的棉花MYB基因的表達(dá)和功能研究[D]. 孫翔.華中師范大學(xué) 2013
[2]菜用大豆轉(zhuǎn)錄因子基因GmMYB103的表達(dá)及功能初步分析[D]. 袁玲玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子TDF1在花藥發(fā)育過程中分子調(diào)控機(jī)理的研究[D]. 周茜.上海師范大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2921837