TANK結(jié)合激酶1（TBK1）是一種對(duì)TRL和RIG-I介導(dǎo)的MAVS依賴(lài)的抗病毒免疫相關(guān)信號(hào)通路中發(fā)揮作用的關(guān)鍵激酶,并且是誘導(dǎo)I型IFN產(chǎn)生和宿主抗病毒反應(yīng)必備的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。本文研究的TBK1樣轉(zhuǎn)錄子即TBK1L是從斑馬魚(yú)克隆而來(lái)。相對(duì)比TBK1而言,TBK1L含有一個(gè)不完全的S_TKc結(jié)構(gòu)域,缺少UBL_TBK1結(jié)構(gòu)域。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示:TBK1L在胚胎、初孵的魚(yú)卵及ZF4細(xì)胞中持續(xù)表達(dá),當(dāng)用ssRNA病毒鯉春病毒血癥病毒（SVCV）刺激ZF4細(xì)胞,TBK1L表達(dá)量并沒(méi)有改變。在斑馬魚(yú)胚胎或ZF4細(xì)胞中TBK1的過(guò)表達(dá)能顯著誘導(dǎo)斑馬魚(yú)IFN1和IFN3啟動(dòng)子的激活,而TBK1L的過(guò)表達(dá)卻不能導(dǎo)致斑馬魚(yú)IFN1和IFN3啟動(dòng)子的激活。同樣,在CPE細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TBK1具有抗SVCV效果,TBK1L卻無(wú)抗病毒作用。然而過(guò)表達(dá)的TBK1L卻能在RLRs、MAVS和TBK1的介導(dǎo)下抑制斑馬魚(yú)IFN1或IFN3啟動(dòng)子激活。此外,斑馬魚(yú)胚胎細(xì)胞中過(guò)表達(dá)TBK1能夠誘導(dǎo)IFN激活基因（ISGs）的上調(diào)表達(dá),而在胚胎中過(guò)表達(dá)TBK1L卻使許... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

NADPH氧化酶信號(hào)傳導(dǎo)圖(引自Brownetal2009)

圖 1.2 NADPH 氧化酶的組裝（引自 Groemping et al，2005）Fig 1.2 The assembling of NADPH (Groemping et al，2005)NADPH 氧化酶通常是靜止的，當(dāng)吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨等受到細(xì)胞因子、激素或病原微生物刺激時(shí)，具有殺滅微生物功能的上述細(xì)的 NADPH 氧化酶被激活，誘導(dǎo)吞噬細(xì)胞等發(fā)生了一系列的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜重裝與組合。位于細(xì)胞質(zhì)中的調(diào)節(jié)亞基 p40phox、p47phox、p67phox 及 Rac細(xì)胞色素 b558 基團(tuán)上的 gp22phox 上富含脯氨酸的尾巴結(jié)合，改變了 gp91ph象，移除了 gp91phox 亞基上的 20 個(gè)氨基酸殘基，形成具有完整生物活性的合體，使得 NADPH 氧化酶與其底物 NADPH 接觸，釋放電子發(fā)生氧化還原產(chǎn)生 ROS(圖 1.2)(Groemping and Rittinger 2005；Nauseef 2004)。同時(shí) p47ph被磷酸化，解除了細(xì)胞內(nèi)部反應(yīng)物之間的抑制作用，同時(shí)在細(xì)胞膜上與 p6p22phox 1:1結(jié)合。磷酸化的p47phox 有助于p40phox 和p67phox 構(gòu)象改變與

nlm.nih.gov/Structure/cdd/docs/cdd_search.html) 氨基酸序列比對(duì)分析結(jié)果顯示：TBK1L含有一個(gè)不完整的STKc_TBK1結(jié)構(gòu)域。與TBK1相比，TBK1L缺少UBL_TBK1樣結(jié)構(gòu)域（圖4.1）。使用Mega4.1鄰接法構(gòu)建了斑馬魚(yú)TBK1L同其它物種TBK1/TBK1L基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所得的TBK1/TBK1L分子同魚(yú)類(lèi)TBK1/TBK1L聚為一枝，斑馬魚(yú)TBK1L與青鱂TBK1L親緣關(guān)系最近，聚在一支。斑馬魚(yú)TBK1/TBK1L與其它脊椎動(dòng)物TBK1/TBK1L聚為一大枝（圖4.2）。37


本文編號(hào)：2921831