Period（Per）作為典型的生物鐘基因,在果蠅,斑馬魚和小鼠中是高度保守的。雖然果蠅的per基因只有一個,但哺乳動物有三個Per基因,分別為Per1、Per2、Per3。斑馬魚的per基因有四個,per1a、per1b、per2和per3,其中per1a和per1b是哺乳動物Per1的共同直向同源基因,并來自于硬骨魚類第三次基因組復制（TGD）。本實驗室已對斑馬魚per1b基因在生物鐘中的功能進行了系統(tǒng)性的分析,但是per1a在生物鐘中的功能尚不清楚。為了驗證per1a是否受到生物鐘的調(diào)控,通過熒光實時定量PCR結果顯示,per1a基因在野生型斑馬魚中的表達具有節(jié)律性,并且在clock1a純合突變體中表達下調(diào)。為了驗證per1a對生物鐘的調(diào)控作用,我們利用實驗室已有的per1a純合突變體（per1a-/-）,在持續(xù)黑暗（DD）條件下,該純合突變體的幼魚行為的周期、相位和振幅與野生型的相比并沒有顯著差異但是在持續(xù)光照（LL）條件下,周期不變,振幅減小,相位前移。并且我們構建了松果體特異性敲除per1a的轉基因魚系Tg（U6x:sgRNA（per1a）:LC）;Tg（exorh:Cas... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

per1a基因是有生物鐘節(jié)律的并受生物鐘調(diào)控

的per1a對斑馬魚的行為節(jié)律沒有影響（A）松果體):LC)）轉基因魚系熒光圖片。在持續(xù)黑暗（DD）（D）和相位（E）進行分析。(E) 收取的正常光基因魚系在下的行為。（F）正常光暗條件（LD）基因魚系的總的活動量。在持續(xù)光照（LL）條件相位（J）進行分析。對照組為藍色線條，松果體性分析*代表 P<0.05，**代表 P<0.01，***因在全身敲除的 per1a 純合突變體魚 per1a 基因?qū)Π唏R魚幼魚的自主行為節(jié)有兩個，即 per1a 和 per1b，可能是因為的作用。為了進一步檢測 per1a 的純合突

a 轉錄組分析（A）per1a 純合突變體與野生型在 CT2 和 CT12 時差異表差異性表達基因數(shù)目分析，81 個基因在 CT2 和 CT12 都有表達，藍色代T12。（B）在 CT2 時生物鐘核心基因 per1a,per1b,per2,per3 發(fā)生變化。生物鐘節(jié)律過程有很大的變化。（D）在 CT12 時，生物鐘節(jié)律過程的變頭代表生物鐘節(jié)律過程。5. 生物鐘基因在全身敲除的 per1a 純合突變體中是下高通量測序的結果，我們利用 qRT-RCR 來檢測 per1a 純合突基因的表達水平。首先把受精的斑馬魚胚胎置于魚房正常的光主生物鐘的形成，在胚胎受精后第 5 天（96 hpf）開始收集樣不同的光照條件，每隔 4 個小時采集一次樣本，每次收集 30 結束，共 24 小時，7 個時間點收取正常光暗 LD 條件下的樣品件下的樣品則是受精后前 72 小時處于正常的光暗條件，在 7


本文編號：2917736