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棉大卷葉螟絲素P25基因的克

發(fā)布時間:2020-12-15 08:53
  棉大卷葉螟(Sylepta derogata Fabricius)屬鱗翅目螟蛾科,是一種分布廣泛的多食性害蟲。為了深入了解棉大卷葉螟的吐絲機(jī)理,本文研究了棉大卷葉螟絲素P25基因,通過基因克隆技術(shù)得到其cDNA序列全長,并檢測分析在不同發(fā)育階段、取食不同寄主后棉大卷葉螟絲素P25基因的相對表達(dá)量。以此為基礎(chǔ),進(jìn)行RNA干擾試驗(yàn),采用飼喂法干擾其絲素P25基因的表達(dá),從而進(jìn)行功能驗(yàn)證。主要研究結(jié)果如下:1、通過比對其他已知的鱗翅目昆蟲的絲素P25基因,運(yùn)用RACE法克隆得到棉大卷葉螟絲素P25基因全長。棉大卷葉螟絲素P25基因cDNA全長為859bp,起始密碼子為ATG,終止密碼子為TAG,編碼區(qū)全長為663bp,并將所獲得的基因全長提交到GenBank,登錄號為KY792994。依據(jù)棉大卷葉螟絲素P25基因的核苷酸序列轉(zhuǎn)換為其氨基酸序列,并加以分析,估算該蛋白分子量為25.653kDa,等電點(diǎn)pI為8.02。將所獲得的基因全長同已經(jīng)登錄到GenBank的其他昆蟲絲素P25基因序列進(jìn)行同源性比對,與大蠟螟(Galleria mellonella)的同源性最高,達(dá)到63%,其次為外米綴蛾(... 

【文章來源】:揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】:72 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

棉大卷葉螟絲素P25基因的克


圖2-1棉大卷葉螟絲素基因中間片段PCR擴(kuò)增結(jié)果??

序列,棉大卷葉螟,絲素,基因


2.?8.?2?3’?RACE擴(kuò)增結(jié)果??以棉大卷葉螟總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,利用已設(shè)計好的3’?RACE特異性引物??進(jìn)行巢氏PCR擴(kuò)增,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,結(jié)果見圖2-2。片段大小在350bp??左右,符合預(yù)期。切下膠塊,經(jīng)膠回收純化后與PMD-18T相連,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿??菌DH5?a感受態(tài)細(xì)胞中,挑取單菌落進(jìn)行菌液PCR,將含有特異目的基因的單克隆菌液送??至上海生工生物工程有限公司測序。測序結(jié)果表明該序列長357bp。??M??/600Q?^m:??%SOOO??04000??/V3500??二1200??^l〇0°?I??>-700??s^60Q?C??圖2-2棉大卷葉螟絲素沒5基因3’?RACE?PCR擴(kuò)增結(jié)果??2.?8.?3?5’?RACE擴(kuò)增結(jié)果??以棉大卷葉螟總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,利用已設(shè)計好的兩對5’端特異性引物??分別進(jìn)行巢氏PCR擴(kuò)增,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,結(jié)果如圖所示。片段大小均??在200bp左右,符合預(yù)期。切下膠塊,經(jīng)膠回收純化后與pMD-18T相連,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化??至SK2301感受態(tài)細(xì)胞中,挑取單菌落,以pMD18-T載上的通用引物做PCR,將含有特異目??的基因的單克隆菌液送至上海生工生物工程有限公司測序。測序結(jié)果表明該序列長370bp。??

序列,棉大卷葉螟,絲素基因


2.?8.?2?3’?RACE擴(kuò)增結(jié)果??以棉大卷葉螟總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,利用已設(shè)計好的3’?RACE特異性引物??進(jìn)行巢氏PCR擴(kuò)增,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,結(jié)果見圖2-2。片段大小在350bp??左右,符合預(yù)期。切下膠塊,經(jīng)膠回收純化后與PMD-18T相連,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿??菌DH5?a感受態(tài)細(xì)胞中,挑取單菌落進(jìn)行菌液PCR,將含有特異目的基因的單克隆菌液送??至上海生工生物工程有限公司測序。測序結(jié)果表明該序列長357bp。??M??/600Q?^m:??%SOOO??04000??/V3500??二1200??^l〇0°?I??>-700??s^60Q?C??圖2-2棉大卷葉螟絲素沒5基因3’?RACE?PCR擴(kuò)增結(jié)果??2.?8.?3?5’?RACE擴(kuò)增結(jié)果??以棉大卷葉螟總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,利用已設(shè)計好的兩對5’端特異性引物??分別進(jìn)行巢氏PCR擴(kuò)增,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,結(jié)果如圖所示。片段大小均??在200bp左右,符合預(yù)期。切下膠塊,經(jīng)膠回收純化后與pMD-18T相連,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化??至SK2301感受態(tài)細(xì)胞中,挑取單菌落,以pMD18-T載上的通用引物做PCR,將含有特異目??的基因的單克隆菌液送至上海生工生物工程有限公司測序。測序結(jié)果表明該序列長370bp。??

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[3]昆蟲RNAi技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 何正波,陳斌,馮國忠.  昆蟲知識. 2009(04)
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[6]三種轉(zhuǎn)基因抗蟲棉對棉大卷葉螟的抗性[J]. 黃東林,劉漢勤.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2005(02)
[7]轉(zhuǎn)Bt基因棉對棉大卷葉螟種群動態(tài)的影響[J]. 劉芳,楊益眾,陸宴輝,康曉霞,余月書,陳建,吳潔云,萬年峰.  昆蟲知識. 2005(03)
[8]昆蟲的絲和絲腺[J]. 王孟卿,彩萬志.  昆蟲知識. 2004(01)
[9]轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉對棉大卷葉螟抗性的研究[J]. 王厚振,肖云麗,鄭成民,王書友,孟妍遐.  植保技術(shù)與推廣. 2002(03)
[10]蠶絲纖維組成的研究[J]. 黃君霆.  蠶桑通報. 2001(04)

碩士論文
[1]棉大卷葉螟對棉花和苘麻的偏好性評價[D]. 陳玲.揚(yáng)州大學(xué) 2014



本文編號:2918011

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