棉大卷葉螟(Sylepta derogata Fabricius)屬鱗翅目螟蛾科,是一種分布廣泛的多食性害蟲。為了深入了解棉大卷葉螟的吐絲機(jī)理,本文研究了棉大卷葉螟絲素P25基因,通過基因克隆技術(shù)得到其cDNA序列全長,并檢測分析在不同發(fā)育階段、取食不同寄主后棉大卷葉螟絲素P25基因的相對表達(dá)量。以此為基礎(chǔ),進(jìn)行RNA干擾試驗(yàn),采用飼喂法干擾其絲素P25基因的表達(dá),從而進(jìn)行功能驗(yàn)證。主要研究結(jié)果如下:1、通過比對其他已知的鱗翅目昆蟲的絲素P25基因,運(yùn)用RACE法克隆得到棉大卷葉螟絲素P25基因全長。棉大卷葉螟絲素P25基因cDNA全長為859bp,起始密碼子為ATG,終止密碼子為TAG,編碼區(qū)全長為663bp,并將所獲得的基因全長提交到GenBank,登錄號為KY792994。依據(jù)棉大卷葉螟絲素P25基因的核苷酸序列轉(zhuǎn)換為其氨基酸序列,并加以分析,估算該蛋白分子量為25.653kDa,等電點(diǎn)pI為8.02。將所獲得的基因全長同已經(jīng)登錄到GenBank的其他昆蟲絲素P25基因序列進(jìn)行同源性比對,與大蠟螟(Galleria mellonella)的同源性最高,達(dá)到63%,其次為外米綴蛾(... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１棉大卷葉螟絲素基因中間片段ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??

２．?８．?２?３’?ＲＡＣＥ擴(kuò)增結(jié)果??以棉大卷葉螟總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄的ｃＤＮＡ為模板，利用已設(shè)計好的３’?ＲＡＣＥ特異性引物??進(jìn)行巢氏ＰＣＲ擴(kuò)增，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測ＰＣＲ產(chǎn)物，結(jié)果見圖２－２。片段大小在３５０ｂｐ??左右，符合預(yù)期。切下膠塊，經(jīng)膠回收純化后與ＰＭＤ－１８Ｔ相連，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿??菌ＤＨ５?ａ感受態(tài)細(xì)胞中，挑取單菌落進(jìn)行菌液ＰＣＲ，將含有特異目的基因的單克隆菌液送??至上海生工生物工程有限公司測序。測序結(jié)果表明該序列長３５７ｂｐ。??Ｍ??／６００Ｑ?＾ｍ：??％ＳＯＯＯ??０４０００??／Ｖ３５００??二１２００??＾ｌ〇０°?Ｉ??＞－７００??ｓ＾６０Ｑ?Ｃ??圖２－２棉大卷葉螟絲素沒５基因３’?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??２．?８．?３?５’?ＲＡＣＥ擴(kuò)增結(jié)果??以棉大卷葉螟總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄的ｃＤＮＡ為模板，利用已設(shè)計好的兩對５’端特異性引物??分別進(jìn)行巢氏ＰＣＲ擴(kuò)增，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測ＰＣＲ產(chǎn)物，結(jié)果如圖所示。片段大小均??在２００ｂｐ左右，符合預(yù)期。切下膠塊，經(jīng)膠回收純化后與ｐＭＤ－１８Ｔ相連，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化??至ＳＫ２３０１感受態(tài)細(xì)胞中，挑取單菌落，以ｐＭＤ１８－Ｔ載上的通用引物做ＰＣＲ，將含有特異目??的基因的單克隆菌液送至上海生工生物工程有限公司測序。測序結(jié)果表明該序列長３７０ｂｐ。??

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]棉大卷葉螟對棉花和苘麻的偏好性評價[D]. 陳玲.揚(yáng)州大學(xué) 2014



本文編號：2918011