目的通過構(gòu)建TGIF（TG-interacting factor,TGIF）穩(wěn)定低表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株（A549）,觀察沉默TGIF對A549細(xì)胞周期分布及Wnt/β-Catenin信號通路的影響,探討TGIF調(diào)控細(xì)胞周期的分子機(jī)制及對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞致瘤性的影響,為肺癌的治療提供新的作用靶點。方法1.采用靶向TGIF的慢病毒顆粒和無效干擾對照慢病毒顆粒分別感染A549細(xì)胞,構(gòu)建TGIF穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞株（A549-shTGIF）和無效干擾對照細(xì)胞株（A549-shcon）,通過蛋白免疫印跡（Western blots）檢測TGIF蛋白表達(dá)水平,鑒定TGIF穩(wěn)定低表達(dá)的A549細(xì)胞株是否構(gòu)建成功。2.利用CASY細(xì)胞計數(shù)分析儀分析接種細(xì)胞24小時、48小時、72小時、96小時后,A549-shTGIF和A549-shcon細(xì)胞增殖的差異。3.通過體外軟瓊脂克隆形成實驗和體內(nèi)裸鼠致瘤實驗,分析TGIF穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞與無效干擾對照細(xì)胞致瘤性的差異。4.利用流式細(xì)胞儀分析TGIF穩(wěn)定低表達(dá)組與無效干擾對照組細(xì)胞周期分布的差異。5.運用Western blots分析沉默TGIF對A549細(xì)... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

tern blots 檢測 shRNA 對靶基因的沉默效率測靶向 TGIF 的慢病毒顆粒和無效對照慢病毒顆粒感染的基因沉默效率，我們用 Western blots 分別檢測兩組慢病毒胞中 TGIF 蛋白的表達(dá)水平。如圖 3.1 所示，我們用β-Ac白上樣量的評估，在β-Actin 蛋白表達(dá)量一致的情況下，IF 蛋白表達(dá)水平要遠(yuǎn)低于 A549-shcon 細(xì)胞。這說明 TGIF肺癌細(xì)胞 A549 細(xì)胞株構(gòu)建成功。

圖 3.2 沉默 TGIF 基因?qū)?A549 細(xì)胞增殖能力的影響9-shcon 細(xì)胞數(shù)相比，同一時點的 A549-shTGIF 細(xì)胞數(shù)顯著降TGIF 基因?qū)?A549 細(xì)胞體外克隆形成能力的影隆形成實驗結(jié)果顯示，與 A549-shcon 細(xì)胞(58.4±4.049-shTGIF 細(xì)胞的克隆形成數(shù)量(37.3±2.6)明顯降低(圖(P<0.05)。結(jié)果提示，沉默 TGIF 基因可以降低 A54克隆的能力。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TGIF,MMP9和蛋VEGF白在胃癌中的表達(dá)及臨床病理聯(lián)系[J]. 胡忠良,文繼舫,沈明,劉英.  中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2006(01)
[2]TGIF對胃癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的影響[J]. 胡忠良,文繼舫,肖德勝,鄭暉,傅春燕.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(09)
[3]Effects of transforming growth interacting factor on biological behaviors of gastric carcinoma cells[J]. Zhong-Liang Hu, Ji-Fang Wen, De-Sheng Xiao, Hui Zhen, Chun-Yan Fu, Department of Pathology, Basic Medical Institute, Central South University, Changsha 410078, Hunan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(01)



本文編號：2907826