十字花科蔬菜黑斑病是由鏈格孢引起的世界性真菌病害,從20世紀(jì)90年代開(kāi)始,該種病害在我國(guó)北方發(fā)生嚴(yán)重,至今仍對(duì)十字花科蔬菜的生產(chǎn)存在較大威脅。蕓薹生鏈格孢（Alternaria brassicicola）為該病害主要病原之一。轉(zhuǎn)錄因子是參與病原菌生長(zhǎng)發(fā)育及致病性的重要調(diào)控因子,因此研究蕓薹生鏈格孢的致病相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子,有助于認(rèn)識(shí)其致病分子作用機(jī)制,對(duì)于防治蕓薹生鏈格孢引起的黑斑病至關(guān)重要。鋅指蛋白中的Zn₂Cys₆是真菌中特有的一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控真菌的多種生理過(guò)程,包括真菌的生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和侵染寄主的過(guò)程。該類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子在蕓薹生鏈格孢菌種中尚未被系統(tǒng)的研究。本研究主要以蕓薹生鏈格孢（A.brassicicola）的一個(gè)Zn₂Cys₆轉(zhuǎn)錄因子基因Ab06986為研究對(duì)象,克隆了Ab06986基因,對(duì)Ab06986基因缺失突變體的生物學(xué)性狀進(jìn)行了研究,系統(tǒng)探索了Ab06986基因的生物功能。本研究共獲得了三株Ab06986基因缺失突變體,與野生菌、互補(bǔ)體的性狀功能對(duì)比結(jié)果如下:（1）Ab06986基因參與調(diào)控蕓... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Ab06986DNA與cDNA擴(kuò)增PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳

圖 1 Ab06986 DNA 與 cDNA 擴(kuò)增 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳1.DNAPCR 產(chǎn)物；2.cDNAPCR 產(chǎn)物；M.DNAMarker D2000Fig.1 Agarose gel electrophoresis of the PCR product from theAb06986 DNA and cDNA1.PCR product of DNA;2.PCR product of cDNA;M.DNAMarker D2000以蕓薹生鏈格孢基因組 DNA 及 cDNA 為模板，Ab06986-F 和 Ab06986-R 為引物擴(kuò)增并進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖 1 所示。將目的條帶進(jìn)行 PCR 產(chǎn)物回收，并交由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。經(jīng)過(guò)分析發(fā)現(xiàn)蕓薹生鏈格孢中 Ab06986 基因大小為 1240 bp，RNA 為 1140 bp，其中內(nèi)含子 2 個(gè)，分別位于基因的 58-108 處和 346-397處，編碼 379 個(gè)氨基酸。3.1.3Ab06986 基因的保守區(qū)分析將 Ab06986 基因預(yù)測(cè)蛋白進(jìn)行保守區(qū)序列分析，在 NCBI 上將基因 Ab06986 blast，顯示在 50bp-150 bp 之間存在 Zn2+結(jié)合域，如圖 2 所示：

圖 3 蕓薹生鏈格孢 Ab06986 基因與其他真菌同源基因相似性比對(duì)結(jié)果Fig.3 Comparison of genetic similarity between Alternaria alternataAb06986 gene and other fungi3.1.4Ab06986 基因的相似性比對(duì)利用 NCBI BLAST-protein 程序?qū)y(cè)序得到的 Ab06986 氨基酸序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中其它真菌同源基因氨基酸序列進(jìn)行同源分析，并建立真菌系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)如圖 4 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2904580