Ph-like ALL（Philadelphia chromosome-like Acute Lymphoblastic Leukemia）為最新報道的一種ALL亞型,在ALL中約占20%。表達譜聚類分析發(fā)現(xiàn)其基因表達與BCR-ABL1陽性ALL（Ph+ALL）相似,臨床預后也相似,但不存在BCR-ABL1融合基因。Ph-like ALL涉及激酶信號通路異�；罨鸵幌盗屑毎蜃邮荏w基因異常,并常伴有淋系發(fā)育相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子異常。近幾年研究發(fā)現(xiàn),基于Ph-like ALL分子遺傳學異常,使用相應(yīng)的酪氨酸激酶抑制劑（TKIs）聯(lián)合化療可以顯著改善Ph-like ALL的療效。因此,檢測Ph-like ALL相關(guān)的分子遺傳學異常具有重要的臨床意義。本研究采用實時PCR技術(shù)平臺,以Ph-like ALL相關(guān)的32種融合基因和一項獨立預后因素為檢測對象,結(jié)合媒介探針技術(shù)和HAND系統(tǒng)（Homo-Tag Assisted Non-Dimer）,建立四管多重實時PCR的檢測方法,可檢測與Ph-like ALL相關(guān)的32種融合基因（42種以上的融合形式）和一項獨立預后因素。首先通過文獻調(diào)研確認每種融合基因... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ＣＯＧ的Ｐｈ－ｌｉｋｅ?ＡＬＬ診斷方案丨６６丨??Ｆｉｇｕｒｅｌ－２?Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ?ａｌｇｏｒｉｔｈｍ?ｆｏｒ?ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ?Ｐｈ－ｌｉｋｅ?ＡＬＬ．??

起到封閉作用，防止其結(jié)合到靶ＤＮＡ后延伸；另一條是通用檢測探針??（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｐｒｏｂｅ），為分子信標其５＇端標記熒光基團和３＇端標記萍??滅基團，其中分子信標的莖序列的３＇區(qū)有一段序列為媒介子雜交區(qū)域（圖１－??３?Ａ）。??基于分子信標媒介探針技術(shù)的工作流程如下：（１）引物和媒介探針退火結(jié)合。??在ＰＣＲ過程中的變性步驟，模板的ＤＮＡ雙鏈分開，上下游引物和媒介探針??的靶特異序列分別與模板的ＤＮＡ相應(yīng)的鏈雜交（圖１－３?Ｂ１）；?（２）引物延伸??和媒介探針被切。引物在延伸過程中，由于媒介探針５＇區(qū)媒介子不與靶ＤＮＡ??匹配，因此媒介子被具有５＇—３＇外切酶活性的ＤＮＡ聚合酶切斷（該酶切位點??主要是在媒介探針上靶結(jié)合序列與靶互補的第一個和第二個堿基中間切斷）??［７５，７６］，從而使媒介子被切下并暴露出３ｆ－０Ｈ，而與靶互補的探針則被消化成??碎片［７６］（圖１－３Ｂ２）；?（３）媒介子的退火和延伸。再下一輪的ＰＣＲ退火過程，??暴露出３ｆ－ＯＨ的媒介子雜交在分子信標通用檢測探針的環(huán)序列上并延伸，打??開分子信標的莖序列

（＿＿０３２６８２．５），其中，別７戶２／４－／４５１／存在３種融合形式（圖２－１八）。具體的??斷裂點見圖２－１。Ｊ５Ｚ７的斷裂點有ｅｘｏｎ２、ｅｘｏｎ３和ｅｘｏｎ４，考慮到擴增子的長??度不能太長，所以上設(shè)計了兩條下游引物和兩條媒介探針，斷裂點ｅｘ〇ｎ２??和ｅｘｏｎ?３共用下游引物和媒介探針。媒介探針和其他上游引物的設(shè)計位點如圖??２－１?Ｂ所示。??Ａ??ＥＴＶ６－ＡＢＬｌ（ｅ５？２）?ＲＣＳＤＪ－ＡＢＬｌ（ｅ２－ｅ４）??ｉ?５?Ｉ?ｉ２１?一３?ｉ?ｍｆｍ?丨４一?｜５｜??ＮＵＰｍ－ＡＢＬＨｅｎ－．Ｄ＾ｌ）?（ｅ３４－ｅ３）?５，Ｖ＾－．？Ｉ／（ｅ３－ｅ４）????３２?｜?３３?｜?３４］?Ｉ?２?Ｉ?３?￣Ｉ?Ｉ?２?｜￣＊３?Ｖｆ????￣Ｉ￣Ｉ?■■一、??ＺＸＨＺｌ－ＡＢＬＪ（ｅ＼Ｓ－ｅ２）??３２?３２?２?３?一?—????ｒ＾ｎ?￣￣????ＲＴＩ￣１７?Ｉ?１８丨?２?３￣??３２?３３?３４?３?４???????????????ＦＯＸＰＪ－ＡＢＬＪ（ｅ［９－ｅ４）??Ｒ．４ＮＢ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]兒童Ph-like急性淋巴細胞白血病的研究進展[J]. 唐雪,郭霞.  中國當代兒科雜志. 2017(11)
[2]《中國成人急性淋巴細胞白血病診斷與治療的指南(2016版)》解讀[J]. 鄒德慧.  臨床血液學雜志. 2017(05)
[3]急性淋巴細胞白血病的分子遺傳學研究進展[J]. 陳蘇寧,王謙.  臨床血液學雜志. 2017(03)
[4]Ph-like急性淋巴細胞白血病[J]. 沈樹紅.  中國實用兒科雜志. 2016(04)
[5]Ph樣急性淋巴細胞白血病的分子遺傳學進展:第56屆美國血液學會年會報道[J]. 張陽,劉紅星.  白血病·淋巴瘤. 2015 (02)
[6]IKZF1基因IK6亞型在成人急性淋巴細胞白血病中的表達及臨床意義[J]. 袁田,趙邢力,張麗霞,李慶華,田征,唐克晶,王迎,林冬,李巍,劉兵城,周春林,王敏,王建祥,秘營昌.  中國實驗血液學雜志. 2013(03)

碩士論文
[1]流式細胞術(shù)檢測兒童白血病細胞磷酸化信號蛋白的初步研究[D]. 李華梅.廣州醫(yī)學院 2011
[2]多色實時PCR用于食源性致病菌的廣譜檢測與識別[D]. 張佳峰.廈門大學 2007



本文編號：2904629